基因工程的基本操作程序.pptVIP

目的基因的mRNA 单链DNA (cDNA） 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 1）反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 2）人工化学合成法 ： （三）、人工合成目的基因（在DNA合成仪中合成） 根据已知的氨基酸序列合成DNA 基因比较小，核苷酸序列已知 第三十一页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 二、基因表达载体的构建——基因工程的核心 目的： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 第三十二页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 编码区： 能转录，编码蛋白质 非编码区： 不编码蛋白质,能调控遗传信息表达 * * 第三十三页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子 外显子 与RNA聚合酶结合位点 编码区： 非编码区： 外显子： 内含子： 能编码蛋白质的序列 不能编码蛋白质的序列 * * 第三十四页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 非编码区 非编码区 编码区 RNA聚合酶结合位点 外显子 内含子 终止子 启动子 原核 真核 基因的结构 * * 第三十五页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是 _____的 编码区是间隔的、_____的 相同点 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 * * 第三十六页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 2、表达载体的组成 启动子 终止子 目的基因 标记基因等 第三十七页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 质粒 DNA分子 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 3.过程: 第三十八页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 ①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 注意 第三十九页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 1、构建重组质粒时，需用 切割 含目的基因的DNA和载体。目的是 。 切割含目的基因的DNA和载体并非只能用同一种限制酶。 2、为防止载体与目的基因自身环化，应该怎么做？ 3、目的基因与载体成功连接的基础是什么？ 4、目的基因的插入位点不是随机的。 目的基因的插入不能破坏载体上自身需要的基因片段， 以及其上的标记基因，且插入在启动子和终止子之间。 5、受体细胞不同，基因表达载体的构建也会有 差异。 第四十页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 基因工程载体的构建需要考虑的因素： （1）基因的特点：若来自动物的目的基因含有内含子， 不能用于转基因植物； 若基因产物是糖蛋白，该基因在原核生物中 的表达蛋白不具备天然的活性； （2）要选择强启动子或组织特异性启动子； （3）要有选择标记基因； 第四十一页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 三、将目的基因导入受体细胞 （一）转化 （二）方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——Ca2+处理法 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 第四十二页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 1、将目的基因导入植物细胞的方法： （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点： 易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力 ②原理：Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 第四十三页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 ③过程： ④优点：经济、有效 第四十四页，编辑于星期二：十四点 五十九分。 1.2基因工程的基本操作程序 * * * * 第一页