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第四讲中药理化鉴定yf ⑤ 毛细管电泳 优点：具有HPLC与电泳技术长处 进样量少 毛细管电泳 Capillary Zone Electrophoresis (CZE): Migration Superimposed on EOF Micellar Electrokinetic Chromatography (MEKC) 黄芩中6种黄酮类成分胶束电动毛细管色谱图 1.汉黄芩苷 2. 黄芩素 3.黄芩苷 4. 千层纸素 5. 汉黄芩素 6.内标水杨酸 7.白杨素 （4）波谱法 原理：中药成分结构不同 → 产生特征吸收峰 常见方法 可见一紫外分光光度法 红外分光光度法 串联质谱 核磁共振 X线分析法 ①可见－紫外分光光度法 适用范围：总提取物、部分提取物中 某类成分 可通过导数光谱法进行混合物中单一组分的测定 通过指纹图谱进行定性分析 常见谱图 举例 比色法 ②红外分光光度法 主要用于指纹图谱的分析、鉴定。 中药分析 China Pharmaceutical University 第四讲 中药理化鉴别 精品资料 你怎么称呼老师？ 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？ 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ 教师的教鞭 “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘 ……” “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……” 理化鉴别 物理、化学的方法 中药材及其制剂所含的有效成分、主成分或特征性成分进行定性、定量分析，以鉴定真伪、评价品质。　 色谱、波谱 对于化学成分不清楚，或因次要成分的干扰而无法进行主成分分析时，可进行鉴定和识别。 常用的理化鉴定方法　　 显微鉴别 定性反应（颜色或沉淀反应） 色谱法 波谱法 （1）显微鉴别 适用对象： 主要用于药材及成药中药材粉末的鉴别 示例：灵芝孢子胶囊 （2）颜色或沉淀反应 与特定试剂发生反应 不同的颜色或沉淀 生物碱 + 碘化铋钾 沉淀 蒽醌 + 碱液 显色 黄酮 + 盐酸镁粉 现象 内酯 + 异羟肟酸铁 显色 皂苷 - - Liebermann一Burchard 酚类 + 三氯化铁 显色 鞣质 + 明胶 沉淀 氨基酸 + 茚三酮 显色 糖类 + 苯酚－硫酸 显色　　 （3）色谱法 分离、分析鉴双重优势。 常用色谱鉴定方法： 薄层色谱法 气相色谱法 高效液相色谱法 纸色谱法 凝胶电泳 毛细管电泳等技术 ①薄层色谱法 特点：方便、成本小 广泛应用 灵芝胶囊TLC鉴别 阳性对照：鉴别药材按制剂工艺处理，再按鉴别方法提取的溶液 阴性对照：除去制剂中要鉴别的药材，剩下的各味药按制剂工艺处理，再按鉴别方法提取的溶液 方法：对照药材法或对照品法 ②气相色谱法 适用范围：挥发性成通过衍生化后能够气化的成分的定性、定量分析 特点：灵敏度高、分离效率高 注：不挥发的成分，也可采用裂解气相色谱或闪蒸气相色谱来进行鉴定。 示例： 衍生化后GC/MS检测方法时测定银杏内酯A和银杏内酯B 衍生化原理 银杏内酯A： 银杏内酯B： 衍生化产物裂解过程 银杏内酯A： 银杏内酯B 色谱柱：HP-1（17m×200μm×0.10μm） 气化室温度：250℃ 柱温：200℃→230℃（3℃/min）→260℃ （20℃/min） →265℃（2℃/min） 分流进样，分流比5∶1 载气：氦气 流速：0.9ml/min 柱前压：20.2psi 恒压 色谱条件 质谱检测参数 MSD:选择性离子检测（SIM） 离子化方式：电子轰击离子化（EI） 检测离子： MT m/z:301 银杏内酯A m/z:537 银杏内酯B m/z:625 轰击电压：70V 倍增器电压：1624V GC-MS谱图 银杏内酯A 银杏内酯B ③高效液相色谱法 特点：柱效高、分离度好、重现性好 适用范围广 典型色谱图 女贞子提取物HPLC图 进样过程 自动进样 手动进样 注：定量管决定进样体积 举例:不同吴茱萸样品指纹图谱 相似度比较 广西灌阳 四川广元 ④ 凝胶电泳 适合对象：肽类、核酸、多糖等大分子