分生实验：质粒的提取和电泳.pptVIP

第一页，共20页 上次实验小结 1、观察自己组的实验结果：转化平板 *培养板在37C 培养12-16h 卫星菌：培养时间过长 2、实验中的难点 *制备效率高的感受态细胞 o 第二页，共20页 小量制备质粒和电泳分析 实验四 开始实验操作前：本次实验介绍10-15min 第三页，共20页 质粒…… 质粒载体 是存在于细菌染色体外的小型闭合环状双链DNA分子，在宿主细胞内可独立自主复制并赋予宿主细胞一定的遗传性状 筛选标记 MCS（多克隆位点） 复制原点 质粒 第四页，共20页 1)培养细菌使质粒扩增； 2)收集裂解细菌； 3)分离纯化质粒DNA。 质粒提取原理： 质粒提取有多种方法，但都包含有3个基本步骤： √去除蛋白质 √去除基因组DNA √去除RNA *酚-氯仿抽提法 *RNase消化 ？？？ 第五页，共20页 质粒DNA与基因组DNA的区别 大肠杆菌遗传物质 1、部位不同： 2、大小不同： 质粒分子量较小，大小只有普通细菌染色体DNA的百分之一。 基因组DNA分子量较大，细菌基因组约含3000个基因，5?106 bp。 基因组DNA容易断裂线性化 第六页，共20页 碱裂解法提取质粒的原理 原理： 1、强碱和SDS裂解细菌，细菌中的质粒或基因组DNA在碱性条件下发生变性。 2、怎样去除基因组DNA？ 当加入