小鼠骨髓细胞染色体制备与观察.pptVIP

实验二小鼠骨髓细胞染色体制备与观察 第一页，编辑于星期二：十点 二十二分。 实验原理 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞数量较多。 第二页，编辑于星期二：十点 二十二分。 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。 第三页，编辑于星期二：十点 二十二分。 第四页，编辑于星期二：十点 二十二分。 实验目的与要求： 1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。 2.了解小鼠染色体核型。 3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。 器材与试剂 内容与方法 （一）小鼠骨髓细胞染色体制备 预处理 取材，收集细胞 低渗 固定、再固定 滴片 染色 第五页，编辑于星期二：十点 二十二分。 取材前2～3h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。 腹腔内注射秋水仙素2~3小时后，颈椎脱臼处死小鼠。 第六页，编辑于星期二：十点 二十二分。 小白鼠骨骼标本 第七页，编辑于星期二：十点 二十二分。 第八页，编辑于星期二：十点 二十二分。 取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失。 第九页，编辑于星期二：十点 二十二分。 用纱布擦股骨上的肌肉组织，清除干净 注射器抽取生理盐水冲洗骨髓 第十页，编辑于星期二：十点 二十二分。 收集细胞： 暴露骨髓腔， 反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞， 收集到离心管中, 定容至6ml. 第十一页，编辑于星期二：十点 二十二分。 滴2~3滴于玻片上，吹气， 在酒精灯火焰过火8次， 做记号，凉干，染色 滴片： 滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。 第十二页，编辑于星期二：十点 二十二分。 第十三页，编辑于星期二：十点 二十二分。 第十四页，编辑于星期二：十点 二十二分。 作业与思考题 1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各起什么作用？ 3、简述实验中应注意那些关键问题？ 第十五页，编辑于星期二：十点 二十二分。 （二）染色体标本片观察 1.标本片质量评价 （1）细胞密度合适、均匀； （2）背景干净，细胞核和染色体清晰； （3）有较多的分裂相； （4）染色体分散较好。 第十六页，编辑于星期二：十点 二十二分。 细胞密度 第十七页，编辑于星期二：十点 二十二分。 染色体分散度 第十八页，编辑于星期二：十点 二十二分。 2.染色体形态特征观察 第十九页，编辑于星期二：十点 二十二分。 3.染色体计数 （100×10） 15 16 9 9+16+15=40 10 8 22 22+8+10=40 第二十页，编辑于星期二：十点 二十二分。 4.细胞增殖指数统计 细胞增殖指数= 分裂细胞数 分裂细胞数+间期细胞数 ×100% 第二十一页，编辑于星期二：十点 二十二分。