2突变与修复第4节至5节.pptxVIP

第2章 突变与修复第4节 物理诱变剂第5节 化学诱变剂本部分重点紫外线的诱变机制和相对剂量的表示碱基类似物的诱变机制（以5-BU为例）烷化剂的诱变机制脱氨剂的诱变机制（以亚硝酸为例）移码突变剂的诱变机制（以吖啶为例）羟化剂的诱变机制（以羟胺为例）本部分难点诱变剂的生物学效应碱基类似物的诱变机制烷化剂的诱变机制脱氨剂的诱变机制羟化剂的诱变机制一般了解物理辐射的分类物理诱变剂的生物学效应 影响辐射所引起生物效应的因素 紫外线诱变的步骤与方法 电离辐射 新型物理诱变剂 碱基类似物的诱变处理方法一般了解各种烷化剂的性质及诱变处理方法 亚硝酸的性质和诱变处理方法移码突变剂的性质和诱变处理方法 羟化剂的诱变处理方法 其它化学诱变剂诱变剂诱发突变(induced mutation)的发现:1927年，Muller诱变：通过人为的方法，利用物理、化学因素处理微生物以引起突变，这一过程称为诱变。 诱变剂:能诱发生物基因突变，并且突变频率远远超过自发突变率的物理因子或化学物质，称为诱变剂(mutagen)。诱变剂种类：化学诱变剂、物理诱变剂和生物诱变剂第4节 物理诱变剂非电离辐射类的紫外线电离辐射的X射线、γ射线和快中子激光和离子束等4.1 物理诱变剂的生物学效应 高能辐射导致染色体或DNA损伤，继而发生变异；在DNA链之间发生交联作用；DNA链断裂；DNA重新排列组合； G:C-A:T或A:T-G:C的转换；碱基被氧化脱去氨基；碱基分子碳与碳之间的链断裂；碱基或磷酸酯游离出来；产生嘧啶二聚体。 电离辐射主要引起DNA上的基因突变和染色体的畸变；非电离辐射主要导致形成嘧啶二聚体。 4.2 辐射引起生物效应的影响因素 1．微生物的遗传背景 2．微生物的生理状态 3．可见光 4．水分 5．温度 6．空气或氧气4.3 紫外线的诱变机制 DNA与蛋白质的交联；胞嘧啶与尿嘧啶之间的水合作用；DNA链的断裂；形成嘧啶二聚体（主要原因。可以由单链上相邻的两个胸腺嘧啶之间形成，也可以产生于双链相对应的两个胸腺嘧啶之间）嘧啶二聚体的形成嘧啶二聚体的形成阻碍DNA双链分开，复制无法进行，DNA异常。如果在一条单链上出现嘧啶二聚体，影响复制过程中碱基的正常配对。紫外线的有效光谱 紫外线的光谱范围在136 - 390nmDNA可以吸收的紫外线光谱通常为260nm左右;诱发微生物突变的紫外线的有效波长范围是200 —300nm。最有效的波长为253.7nm。 紫外线的辐射剂 绝对剂量:erg/mm2，需要用剂量仪来测定。相对剂量:照射时间/杀菌率(在灯的功率和灯管的距离都固定的情况下，剂量与照射时间成正比关系)注意事项：避免光复活作用，应在红光下操作，避光培养。 4.4 新型诱变剂微波红外线激光高能电子流离子注入第5节 化学诱变剂定义:化学诱变剂是一类能对DNA起作用、改变其结构、并引起遗传变异的化学物质。化学诱变剂往往具有专一性，它们对基因的某部位发生作用，对其余部位则无影响。突变大多为基因突变，并且主要是碱基的改变。 常见化学诱变剂：碱基类似物烷化剂移码突变剂脱氨剂羟化剂等5.1 碱基类似物与天然的四种碱基分子结构相似既能诱发正向突变，也能诱发回复突变的诱变剂。用于诱发突变的碱基类似物有：5-溴尿嘧啶(5-BU)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、 5-碘尿嘧啶(5-IU) 、 5-溴脱氧尿苷(5-BUdr) 等，它们是胸腺嘧啶的结构类似物；2-氨基嘌呤(AP)，6-巯基嘌呤(6-MP)是腺嘌呤的结构类似物。碱基类似物的诱变机制正常的碱基与碱基类似物存在同分异构体，主要由分子内电子分布的改变而引起。互变异构现象：嘧啶分子中以酮式和烯醇式的形式出现；而嘌呤分子中以氨基和亚氨基互为变构的形式出现。互变异构现象在碱基类似物中比正常DNA碱基中频率更高（1）5-溴尿嘧啶(5-BU) 诱发AT GC机制5-BU的结构正常情况下A和T互配掺入5-BU ，A和酮式5-BU互配5-BU由酮式变为烯醇式5-BU，与G互配烯醇式5-BU（2）2-氨基嘌呤（2-AP）诱变机制 比较容易诱发AT→GC这一转换 5.2 烷化剂最常用的一类诱变剂 单功能烷化剂：亚硝基类、磺酸酯类、硫酸酯类、重氮烷类和乙烯亚胺等 双功能烷化剂：硫芥子类与氮芥子类等 烷化位点：G-N7；G-O5，T-O4；G-N3，A-N2 ，A-N7，C-N3 烷化剂的作用机制碱基中最容易发生烷化作用的是嘌呤类 鸟嘌呤N7是最易起反应的位点 烷基化后的鸟嘌呤易离子化，也可由原来的酮式变为不稳定的烯醇式，发生G:C-A:T转换及G:C-C:G或G:C-T:A颠换。部分烷化剂和烷化碱基 （1）鸟嘌呤N7位点烷化导致突变通过对鸟嘌呤N7位点的烷化而导致突变有三种可能：烷化嘌呤引起碱基配对错误脱嘌呤作用 鸟嘌呤的交联作用烷化嘌呤引起