兽医微生物学实习.docxVIP

PAGE PAGE # 实习报告 学 院： 动物医学院 课 程： 兽医微生物实习 班 级： 动物医学82班 学 号： 1718203 姓 名： 王广操 指导教师： 于勇 职称: 实验师 实习时间 2010年6月7日至2010年6月12日 实习地点 逸夫楼微生物教学实验室 4048 2010年6月13 日 南京农业大学教务处制 实习报告 一、目的要求 .了解大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）形态与染色特性以及主要培养 特性； .熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）常规微生物学诊断法； .掌握大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）生化试验的方法和原理； .熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）在选择性和鉴别培养基上的生 长表现； 二、实验材料 .菌种：大肠杆菌和沙门氏菌混合液，产气肠杆菌和变形杆菌混合液 .培养基：半固体培养基 S-S平板麦康凯平板三糖铁高层斜面蛋 白陈水 葡萄糖蛋白陈水 .革兰式染色试剂：草酸俊结晶紫溶液、革兰氏碘溶液、 95%酉精，沙黄水溶 液 .生化管：葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、枸檬酸盐、 H2s尿素 .生化试剂：呷咪试剂， MR、VP试剂 三、实验内容及其安排 （一）、 配培养基：S.S、麦康凯、半固体、三糖铁高层斜面、蛋白陈水、葡萄 糖蛋白陈水。 （二）、 细菌分离培养：将大肠杆菌、沙门氏菌混合肉汤，产气、变形混合肉 汤分别接种麦康凯、S ? S平板，染色镜检 （三）、 挑取麦康凯和S- S平板上单一菌落做染色、镜检，挑单一菌落接种三 糖铁斜面（涂布、穿刺） （四）、观察三糖铁中细菌生长情况。并挑取三糖铁斜面上的细菌分别接种蛋豚 水、葡陈水、半固体、微量生化管，37c培养48h。 （五）、观察结果。 第一天、配培养基（自由分组，5人/组） 第一组S.S培养基：50g S ? S培养基+800ml蒸储水，煮沸溶化浇平板（15ml/ 块平板），无需高压 第二组 麦康凯培养基：44g麦康凯培养基+800ml蒸储水+1.6g琼脂粉，煮沸， 高压15磅，15分钟，浇平板 第三组 三糖铁琼脂：30.5g三糖铁琼脂+500ml蒸储水，煮沸溶化， 装长试管50根（10ml/管），高压15磅，15分钟，做高层斜面 第四组 葡萄糖蛋白陈水：1.25g蛋白陈+1.25g葡萄糖+1.25g磷酸氢二钾+250ml 水，加热溶解，调pH至7.6,分装40根短试管高压（3指半高， 约 5-8ml） 第五组蛋白陈水：1.25g蛋白陈+0.625gNaCl+125ml水，调pH至7.6,分装40 根短试管，捆扎，高压，121c 15分钟 （2指高，约2-4ml） 第六组 半固体：分别称取蛋白陈5g、牛肉膏2.5g、氯化钠2.5g、磷酸氢二钾 0.5g、蒸储水500ml,加热溶解，调pH7.6,过滤 称琼脂粉2g+肉汤500ml,煮沸，待琼脂粉完全溶化，分装短试管（2指高，约2-4ml） 第二天、分离培养 .在麦康凯平板和S- S平板上接种待检材料（大、沙混合菌液；产气、变形混合 菌液） .置37c恒温培养箱内培养24小时 .观察每种平板上细菌的生长情况 .比较单个菌落的形态：染色镜检 SS琼脂强选择性培养基 .培养基中的煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、柠檬酸钠抑制非肠道 菌生长 .不能发酵乳糖的细菌，菌落橘黄色 .分解乳糖的细菌产酸，使胆盐呈胆酸析出，形成中心混浊的深红色菌落 .柠檬酸铁使产生硫化氢的菌落中心呈黑色 .硫代硫酸具有缓和胆盐对细菌的有害作用及煌绿、中性红的毒性作用。 麦康凯培养基 .用于肠道菌的分离与鉴定 .能分解乳糖的细菌--菌落红色 .不能分解乳糖的细菌一菌落灰白色 第三天观察结果接种三糖铁 .观察麦康凯、S.S平板上细菌生长情况.可看到几种菌落，是否圆形光滑凸起 透明的菌落 实验结果： SS琼脂 强选择性培养基：有橘黄色圆形凸起中心为黑色的菌落，橘黄色 为变形杆菌，黑色为产气杆菌。 （2）麦康凯培养基：呈红色圆形凸起菌落和呈灰白色圆形凸起的菌落。其中红 色菌落为 产气杆菌，灰白色菌落为变形杆菌。 （3）镜鉴结果：革兰氏阴性杆菌。 2.挑取单个的细小透明菌落或者红色菌落的一半作革兰氏染色， 镜检，另一半菌 落接种三糖铁培养基（接种时，先涂布斜面，后穿刺底层）、接种蛋白陈水、葡 萄糖蛋白月东水、半固体 3.37 C恒温培养24-48h。 三糖铁琼脂 .用于测定细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖的发酵作用及能否产生硫化氢 .能发酵乳糖、蔗糖 培养基呈黄色 .发酵葡萄糖不发酵乳糖、蔗糖 底层呈黄色、斜面部分为红色(少量酸接触 空气而氧化细菌生长利用含氮物质，生成碱性化合物) .能产生硫化氢 培养基呈黑色 .能产气的细菌 底层琼脂内有气泡 第四天观察结果做生化试验 .观察细菌在三糖铁斜面/底部的生长情况：是否产酸产气，培养基是