生化试剂性能评估及稳定性测试流程和方法PPT参考幻灯片.ppt

精密度-分类 批内精密度 批间精密度 仪器内不精密度（EP5-A2） * 精密度-批内精密度 重复测试20次； 计算均值（X）和标准差（S）； 变异系数 * 精密度-批间精密度 三个批次的试剂测试样本各3次； 计算均值； 按公式计算相对偏差。 * 精密度-仪器内不精密度 操作流程 分装准备2个水平的待测样本； 每天取出2个标本，每个项目每天测定2批(间隔不得少于2小时)，双份测试，共测定20天； 在此期间，保证试剂批号、测定参数和定标系数的不变； 离群点的检查：实验过程中，如每次双份测定的差值超过初步精密度测定时标准差的5.5倍，这对数据为“离群点”，应弃去并重做； 按公式计算结果。 * 精密度-仪器内不精密度 目的：评价整个系统的仪器内总不精密度； 本实验中没有合并可能很重要的变异源如校准物和试剂批号的不同，技术员/操作者的不同； 影响精密度的其他一些因素：如样本预处理，测试物稳定性，携带率和漂移等均包含在内； 可通过合并多设备，多操作者，多批号试剂和校准液及校准周期（如果适当）而减少，但这通常增加精密度标准差。 * 精密度-基本要求 样品一定要稳定，且应与新鲜的临床病人标本性能接近，稳定的冷冻混合血清是首选； 样本中的分析物含量应在该项目的医学决定水平处，尽可能做两个水平的精密度实验； 采用冷冻保存的样品一定要注意内含分析物的稳定，要严格控制冻融、混匀的操作； 一个分析系统上的检测数据只能反应该系统的精密度性能，不能代表该项目在所有机型上的性能，亦不能代表该检测系统对所有项目检测的性能。 * 分析干扰 参照文件：EP7-A（临床化学检验的干扰评价） 定义：指某一物质对某分析物的浓度或催化活力测定中任何一步骤的影响作用成为分析干扰； 分析物（analyte）是标本中准备测定的成分； 干扰物（interferent）也是标本中的一个组分，它不是被分析物，但它改变最后的结果。 * 分析干扰-干扰对偏倚的影响 总分析误差主要有三个原因：不精密度、方法特有偏差和样品特有偏差； 方法评估常常仅评估前两个； 样本偏差（如干扰）通常被认为是特定样本单独的问题，而不是方法可被定量的特性。 * 分析干扰-干扰的机制 化学作用：如干扰物和试剂竞争或抑制指示反应； 物理作用：如干扰物具有和分析物相似的性质，如能产生荧光，颜色等； 基体效应：干扰物可能改变标本基体的物理性质，如浊度、黏度等； 酶的抑制：干扰物能通过抑制金属激活剂、和催化点的结合、或氧化必须的巯基等改变酶（分析物或试剂）活力； 非特异性：干扰物会和分析物以同样方式参与反应； 其他。 * 分析干扰-干扰物测试的浓度 为确定在最坏情况下一种物质是否存在干扰，应当在实验室分析的患者样本中期望观察到的最高浓度处进行全面的干扰筛选 。 药物和代谢物：报告的治疗剂量最高浓度的2倍处测试 ； 内源性物质：确定预期的患者群体期望的最高浓度 ； 抗凝血剂和防腐剂：5倍推荐的添加浓度 ； 进食的物质：测试2倍的期望的最大浓度 ； 注：部分干扰物浓度可参照EP7附录推荐浓度。 * 分析干扰-常分析干扰物 抗坏血酸 黄疸 溶血 脂血 * 分析干扰-具体测试步骤 干扰原液的配制 不同浓度干扰血清标本的制备 测试及结果判断 * 分析干扰-干扰原液的制备 干扰物：获得可能干扰物合适的纯形式，或这种物质最接近循环形式的形式。 溶剂：选择一种足以溶解测试物的溶剂 ，一些可能的溶剂按一般的优先顺序如下列出 ：纯水、HCL或NaOH稀释液、乙烷或甲醇、丙酮、二甲基磺胺、其他有机溶剂。 * 分析干扰-干扰原液的制备 抗坏血酸、黄疸、脂血：分别称取一定量的抗坏血酸纯品、胆红素纯品和内源性酯纯品溶于纯水（胆红素溶于0.1 mol/L的NaOH溶液中 ）中，充分混匀后得到干扰原液； 溶血：以新鲜全血自制溶血干扰物；收集普通全血标本，充分离心；吸走上清液，加入5～10 mL的生理盐水，适度摇动混匀清洗沉积细胞，离心，吸走上清液；重复三次上述过程后