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酸性磷酸酶的会计学第2页/共25页目 的 要 求1. 巩固诊断酶学有关的理论与实验知识；2. 掌握酶的分离纯化方法；3. 掌握酸性磷酸酶（aicd phosphatase ACP）活性测定的原理、方法和影响因素；4. 熟悉酶活性测定的条件选择和方法建立。第3页/共25页试剂与器材一、ACP的分离纯化试剂：见实验教材P31；二、ACP动力学分析试剂：见实验教材P35；三、器材：普通离心机，721分光光度计，恒温水浴箱，研钵等。第4页/共25页实 验 内 容一、ACP的分离纯化二、ACP的比活性分析三、ACP的动力学分析 1. 时间进程（t-V ）曲线 2. 酶浓度-速度（[E]-V）曲线 3. pH-酶活性 （pH-V）曲线 4.底物浓度-速度（[S]-V）曲线 5.抑制剂-速度（[I]-V）曲线第5页/共25页一、ACP的分离纯化 1.概况： ACP分布广泛 分子量100kD 最适pH5.0 热稳定性较好 溶解度较高 临床应用广第6页/共25页2.ACP的分离纯化方法 ? 根据ACP的理化性质，可以用层析、电泳、透析等多种方法分离纯化。 ?本实验采用分级离心+分段盐析法： ACP与其它成分（细胞膜、杂蛋白）密度不同，以次逐步离心分离； ACP能溶解于水和低饱和度的硫酸铵溶液，在70oC仍保持稳定，以此进行杂蛋白的变性沉淀和分段盐析。第7页/共25页3.ACP分离纯化的