非无菌产品微生物检查：控制菌检查法.pptVIP

 供试品检查—耐胆盐革兰阴性菌 耐胆盐革兰阴性菌取代2010年版大肠菌群检查 大肠菌群的定义 是指在37℃生长时能发酵乳糖，24h内产酸产气的革兰阴性、氧化酶阴性、需氧或兼性厌氧的无芽孢杆菌。 符合上述定义的菌除埃希菌属外，还包括肠杆菌科的肠杆菌属、枸橼酸菌属、克雷伯菌属。  耐胆盐革兰阴性菌检查 检验程序 供试液制备 同“非无菌产品微生物检查：微生物计数法制成1：10供试液，混匀。 预培养 在20～25℃培养，培养时间一般2小时,使供试品中的细菌充分恢复但不增殖。 未检出试验 取相当于1g或1mL供试品的上述预培养物接种至 肠道菌增菌肉汤中。 30～35℃，培养24～48小时。 划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上，置 30～35℃，培养18～24小时。 平板上无菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰阴性  耐胆盐革兰阴性菌检查 定量试验 1、取定量供试品的预培养物或其稀释液分别接种至肠道菌 增菌肉汤中。 30～35℃，培养24～48小时。 2、上述每一培养物分别划线接种于紫红胆盐葡萄 糖琼脂平板上。 30～35℃，培养18～24小时。 若紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上有菌落生长，则对应培养管为阳性，否则为阴 性。根据各培养管检查结果，从表2查对1g或1ml供试品中含有耐胆盐革兰阴 性菌的最大可能数。  表2 耐胆盐革兰阴性菌的可能菌数 各供试品量的检查结果 每1g（或1ml）供试品中 可能的菌数（N） 0.1g/ml 0.01g/ml 0.001g/ml ＋ ＋ ＋ N＞103 ＋ ＋ － 102＜N＜103 ＋ － － 10＜N＜102 － － － N＜10  供试品检查—大肠埃希菌 大肠埃希菌是肠杆菌科埃希菌属的代表种。 大肠埃希菌是两端钝圆的短小直杆菌，（1.1～1.5）m×(2.0～ 6.0)μm单个或成 对，革兰阴性无芽孢，多有鞭毛培养最适温度为37℃可在15-46℃生长，兼性厌氧。  修订前 取1:10供试液至胆盐乳糖增菌（大肠、金葡）18-24h MUG培养基（大肠）5h、24h MaC琼脂（大肠 、指示） 18-24h 修订后 取1:10供试液至TSB（大肠、 金葡、）18-24h MaC肉汤 （大肠、 金葡）42-44 ℃ 24-48h MaC 琼脂 （大肠 ）18-72h  方法适用性试验  大肠埃希菌检查 检验程序 取供试品，照附录“微生物计数法”制成1：10供试液。 取相当于1g或1mL供试品的供试液，接种至适宜体积 的胰酪大豆胨肉汤中。 30～35℃培养18～24小时。 取上述预培养物1mL接种至100mL麦康凯肉汤中。 42～44℃培养24～48小时。 取麦康凯肉汤培养物划线接种于麦康凯琼脂平 板上。30～35℃培养18～72小时。结果判断 -若麦康凯琼脂平板上有菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试 验, 确证是否为大肠埃希菌； -若麦康凯琼脂平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结 果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。 非无菌产品微生物检查：控制菌检查法 概述 控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料是否符合相应的微生物标准时，应按规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法， 但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法。 概述 微生物限度检查法中的控制菌检查在药典一、二、三部附录中内容基本一致 参照ICH协调案”非无菌药品微生物限度检查：控制菌检查”进行修订。 主要修订内容 控制菌检