基因敲除的TALEN质粒构建-真菌（yeast）.pdfVIP

真菌靶向基因操作的TALEN 质粒构建 1. 合成的TALEN 将构建到下面两个载体中： pCS2-peas-T pCS2-Perr-T TALEN 质粒对构建好后， 命名为： pCS2-Gene-L and pCS2-gene-R pCS2-peas-T or pCS2-perr-T 质粒图谱 2. TALEN 质粒对构建好后， 将采用 SSA luciferase 报导基因方法检测活性。 TALEN 活性检测合格后，要把 TALEN 的ORF 分别构建到真菌双表达载体上： pY26-GPD-L and pY26-TEF-R ， 最后组装成到一个质粒。 （或者顾客购买我们 的真菌双表达载体，并自行构建； 或者顾客委托我们进行构建）。 3. 构建方法： 1) 将pCS2-Gene-L 用NcoI+XbaI 酶切，产生3K+4K 的两条带，跑胶回收约3k 带， 插入到用NcoI+NheI 的pY26-GPD-L 载体上（酶切仅有一条带）。质粒命名为： pY26-GPD-gene-L 。 2) 将pCS2-Gene-R 用NcoI+XbaI 酶切，产生3K+4K 的两条带，跑胶回收约3k 带, 插入到用N