恙虫病东方体QPCR检测.docxVIP

恙虫病东方体QPCR检测实验 一、研究背景 ①恙虫病东方体Orientia tsutsuganmushi的常用分子检测方法有三种，分别是常规PCR、巢式PCR和QPCR，其中QPCR检测的灵敏度是常规PCR的10000倍，巢式PCR的100倍。 ②恙虫病东方体主要有Karp、kato、Gilliam、Boryong、Kawasaki等抗原型，菌株分型主要依据编码Mr56000蛋白的基因，其具有显著株间变异。 ③目前常用于恙虫病东方体QPCR检测的基因除了编码Mr56000蛋白的基因外，还有编码Mr47000蛋白的基因；也有学者认为分子伴侣groEL基因序列更保守，特异性更高，作为QPCR的目的基因有更好的应用前景。 二、文献报道的扩增56-KDa TSA 基因和groEL基因的巢式PCR引物 三、文献报道的扩增56-KDa TSA 基因的QPCR引物 ①标准序列：GAAAAAAATTATGTTAATTGCTAGTGCAATGTCTGCGTTGTCGTTGCCATTTTCAGCTAGTGCAATAGAATTGGGGGAAGAAGGATTAGAGTGTGGTCCTTATGCTAAAGTTGGAGTTGTTGGAGGAATGATTACTGGCGTAGAATCTGCTCG。 引物如下图： ②标准序列（Gilliam型）：AGATGATAAGGATATTAAAGGGCATAC AGGCATG