三维细胞培养技术培训.ppt

主讲人：赛哲生物 曾宏彬 水凝胶三维细胞培养 广州赛哲生物科技有限公司 服务热线：400-888-4242 ① 什么是三维细胞培养 ② 如何实现三维细胞培养 ③ 水凝胶三维细胞培养 ④ 更多问题 2 3 4 1 广州赛哲生物科技有限公司 服务热线：400-888-4242 什么是三维细胞培养 建立体外三维培养模型将有助于跨越二维细胞培养与动物实验之间的鸿沟。通过模仿体内环境的特性，并利用传统的细胞培养研究工具，三维细胞模型提供了独特的视角来观察干细胞的行为、组织器官和肿瘤的发展过程。这些研究模型有利于加速癌症生物学和组织工程领域的转化研究。 1 1 什么是三维细胞培养 3D 2D VS 2 如何实现三维细胞培养 水凝胶 固体支架 磁力悬浮 2 如何实现三维细胞培养 固体支架三维培养： 组织工程支架作为组织工程的平台，不仅提供了细胞生长的框架，使之形成特定的组织或器官形状；而且作为细胞外基质成分之一，是细胞间信号传导和相互作用的媒介，同时也是细胞生长所必需的生物活性剂。 目前用于组织工程支架的人工合成可降解聚合物主要包括脂肪族聚酯、聚偶磷氮、聚酸酐等。其中研究最多的是脂肪族聚酯，特别是聚乳酸（PLA）、聚乙醇酸（PGA）及其共聚物等。 2 如何实现三维细胞培养 磁力悬浮三维培养： 美国莱斯大学和德克萨斯大学M.D. Anderson癌症中心的研究人员开发出一种生物装配器（bioassembler）。这个系统使用磁力让细胞悬浮，并促使细胞生长成三维的形状。尤其适于培养肝脏和心脏这种细胞密度比较大的实体器官。 2 如何实现三维细胞培养 将细胞培植在一定的细胞外基质中 , 细胞外基质（extracellularmatrix, ECM）蛋白充当生长支架。 水凝胶三维培养： 3 水凝胶三维细胞培养 Matrigel Collagen I Agarose 3 水凝胶三维细胞培养 从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中分离出BD Matrigel 基底膜基质，其主要成分由层粘连蛋白，Ⅳ型胶原，巢蛋白，硫酸肝素糖蛋白等组成，还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。 在室温条件下，聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能，有利于体外细胞的培养和分化，以及对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达的研究。 可促进上皮细胞、肝细胞、Sertoli细胞、黑色素瘤细胞、血管内皮细胞、甲状腺细胞及毛囊细胞等的贴壁与分化。同时，Matrigel还能影响乳腺上皮细胞的蛋白表达，支持外周神经的新生和牛输卵管上皮细胞的分化。高浓度的Matrigel适用于研究体内血管生成和肿瘤细胞迁移及肿瘤模型的建立等。 3 水凝胶三维细胞培养 I型胶原在大部分组织中都有分布，尤其在骨组织、肌腱以及真皮组织中含量极其丰富。I型胶原一般是分离自大鼠尾中，也常被称为鼠尾胶。 Agarose 在酸性条件下成液态，一般保存于醋酸溶液中。使用时，需用PBS稀释成合适的浓度（大于1 mg/ml），并用氢氧化钠调节PH值至7.2-7.4，可聚合形成具有生物学活性的三维基质。 一般用于软骨细胞、骨细胞的三维培养，血管形成试验等。 3 水凝胶三维细胞培养 美国布朗大学的生物工程师 Jeffrey Morgan 利用琼脂糖开发出一种细胞三维培养皿。 Collagen I 将融化的琼脂糖制成微型培养板（micro-moulds），等琼脂糖凝固之后，再将这种琼脂糖材料放置到普通的培养板里。再在培养板里加入细胞和培养基，由于重力的作用，细胞会沉积到琼脂糖培养板里，彼此聚集在一起，形成球形的多细胞团块。 3 水凝胶三维细胞培养 试剂盒组分 BD Matrigel PBS缓冲液 细胞回收液 赛哲生物®水凝胶三维细胞培养系列试剂盒（#SZCE13001~#SZCE13010） 乳腺癌系列、胃癌系列、宫颈癌系列、肝癌系列、肺癌系列 分别用于胶上培养、胶内培养 3 水凝胶三维细胞培养 胶内培养 胶上培养 3 水凝胶三维细胞培养 铺胶 胶上培养：薄胶（ 30~50 μL/cm2），形成约0.5 mm厚度的凝胶 胶内培养：薄胶（可选）+厚胶（100~200 μL/cm2），形成大于1 mm厚度的厚胶 操作步骤： 铺胶前的准备： Matrigel 置于冰上融解； 使用到的所有器材（吸头、小管、培养板）须冰预冷。 铺胶： 薄胶：用冰预冷的吸头吸取60~100μL 液态的Matrigel，均匀涂抹孔板底部，使其厚度均匀，避免产生气泡；在37℃放置30分钟，即可成胶。 3