DNA限制性内切酶消化酶切备课讲稿.pptVIP

DNA限制性内切酶消化酶切 DNA restriction enzyme digestion 实验四 实验原理 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。 限制性内切酶 酶分子 识别位点 切割位点 限制作用是否需用 ATP Ⅰ类 三亚基双功能酶 二分非对称 至少在识别位点外 1000bp Yes Ⅱ类 内切酶与甲基化酶分子不在一起 4-6bp, 大多数为回文对称结构 在识别位点中或靠近识别位点无特异性 No Ⅲ类 二亚基双功能酶 5-7 bp 非对称 在识别位点下游 24-26bp Yes 限制性内切酶可分为三类 实验材料和试剂 实验材料： λDNA：购买或自行提取纯化。 重组pBS质粒或pUC19质粒。 实验试剂： EcoR I酶及其酶切缓冲液：购买成品。 Hind Ⅲ酶及其酶切缓冲液：购买成品。 琼脂糖(Agarose)：进口或国产的电泳用琼脂糖均可。 实验仪器 恒温水浴锅 DNA 1μg 反应 10×缓冲液2μL 重蒸水 19μL 1μL酶液 + 用手指轻弹管壁使溶液混匀，使溶液集中在管底 混匀反应体系后，37℃水浴保温2-3h 每管加入2μL 0.1mol/L EDTA(pH8.0)，电泳检测 EP管编号, 加样 实验步骤 对质粒DNA酶切反应