DNA多聚酶链式反应增DNA片断说课材料.pptVIP

DNA多聚酶链式反应扩增DNA片断;一、课题背景;;(二)PCR技术;PCR;2、DNA合成的方向;;5′;5′;5′;;DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。因此，DNA复制需要引物。 ;3、 DNA 分子的热变性原理：;DNA双链;4、体外复制DNA (PCR) 的条件;（三）、PCR的反应过程;（2）复性：;;PCR反应的温度循环周期 PCR 反应的每一个温度循环周期都是由DNA变性（94℃） 、复性（55 ℃）和延伸（72 ℃）三个步骤完成的。如此周而复始，重复进行，直至扩增产物的数量满足实验需求为止。;（1）PCR循环--变性;（1）PCR循环--变性;（1）PCR循环--变性;（2）PCR循环—复性（退火）;（3）PCR循环—延伸;（3）PCR循环—延伸;（3）PCR循环—延伸;（3）PCR循环—延伸;4、前三次循环图解??;;难点解析：;5、循环特点：;三、实验操作;PCR仪;微量离心管;准备好PCR反应体系的配方 ;实验操作循环程序;PCR反应（无PCR仪时）;四、操作提示;3．在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。;五、结果分析与评价;（二）实验中DNA含量的测定;;2、具体操作：; 根据下面的公式计算DNA含量： DNA含量(μg/ml)＝50 ×(260nm的读数)×稀释倍数;紫外分光光