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实验步骤 6.干燥 用吸水纸吸去多余水分，自然干燥或用电吹风干燥。 7.镜检 将制备好的样片置于显微镜下进行观察、记录。 无菌操作技术 组员：赵华 赵诣 陈珩 杜宇菲 高宝才 高瑞钰 讲解：高宝才 PPT制作：杜宇菲 高瑞钰 资料查找人：赵华 赵诣 陈珩 无菌操作技术 无菌：在科学研究和生产实践中使用的微生物必须是单一的纯种或菌株，不能存在杂菌（非目的菌）。 无菌操作 防止微生物进入机体或物体的方法 在微生物操作过程中，除了使用的容器、用具（试管、三角烧瓶、平皿和吸管等）和培养基必须进行严格的灭菌处理外，还要通过一定的技术来保证目的微生物在转移过程中不被环境中的微生物污染，这些技术包括用接种环（针）、吸管、涂棒等工具进行接种、稀释、涂片、计数和划线分离等。 实验目的 1.学习掌握培养基的配制原理，同时通过对几种培养基的配制掌握配 制培养基的一般方法和步骤。 2.了解高压蒸汽灭菌的原理和应用范围，学习高压蒸汽灭菌的操作技术。 3.证实实验室环境与人体表面存在微生物，体会无菌操作的重要性。 实验目的 4.熟练掌握从固体培养物和液体培养物中转接微生物的无菌操作技术，熟知各种菌种保藏方法，以及各个方法的特点和区别。 5.学习并掌握微生物的制片和简单染色的基本技术，初步了解细菌的形态特征。巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。 实验原理 1. 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 实验原理 2．高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸气急剧地将锅内地冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时，由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100摄氏度的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的 实验原理 3．要知道我们周围存在看得见的微生物可以通过两种方法：一种是通过放大微生物个体，是我们能够看到它们；另一种方法是通过“放大”成子细胞群体（菌落），使我们看到它们的存在，即通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个菌聚集在一起的肉眼可见的菌落。 实验原理 4. 高温对微生物具有致死效应，因此在微生物的转接过程中，一般在火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环（针、铲），以达到灭菌的目的，但一定要保证其冷却后方可进行转接，以免烫死微生物。如果是转接液体培养物，则用预先已灭菌的玻璃吸管或吸嘴；如果只取少量而且勿需定量也可用接种环，视实验目的而定。 实验原理 5.通过分离纯化得到的微生物纯培养物，还必须通过各种保藏技术使其在一定时间内不死亡，不会被其他微生物污染，不会因发生变异而丢失重要的生物学形状，否则就无法真正保证微生物研究和应用工作的顺利进行。保藏菌种的方法包括传代培养保藏、冷冻保藏和干燥保藏。 实验原理 6.对个体较小的细菌进行制片时采取涂片法，通过涂抹使细胞个体在载玻片上均匀分布，避免菌体堆积而无法观察个体形态，通过加热固定使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上，这种加热处理还可以杀死大多数细菌而且不破坏细胞形态。 实验原理 7.利用单一燃料对菌体进行染色的方法称为简单染色。用于染色的燃料是一类苯环上带有发色基因和助色基因的有机化合物。发色基因赋予燃料颜色特征，而助色基因使燃料能够形成盐。不含助色基因而仅具有发色基因的苯化合物（色原）即使具有颜色也不能用作燃料，因为它不能电离，不能与酸或碱形成盐，难以与微生物细胞结合使其着色。常用的微生物细胞燃料都是盐，分碱性染料和酸性燃料，前者包括美蓝、结晶紫、碱性复红、沙黄及孔雀绿等，后者包括酸性复红、伊红及刚果红等。通常采用碱性燃料进行简单染色，原因在于微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中通常带负电荷，而燃料电离之后染色部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着色；当细胞处于酸性条件下所带正电荷增加时，可采用酸性燃料染色。 实验材料 1.牛肉膏，蛋白胨，NaCl，可溶性淀粉，KNO3,K2HPO4.3H2O,MgSO4.7H2O,FeSO4.7H2O,KH2PO4,葡萄糖，孟加拉红（1%的水溶液），链霉素（1%水溶液），1 mol/L NaOH,1mol/L HCL，3%～5%石炭酸或2%～3％来苏尔溶液，2%的葡萄糖溶液，无菌水，金黄色葡萄球菌24h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，草酸铵结晶紫染液，齐氏石炭酸复红染液，吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用碘液，乳酸石炭酸棉蓝染液等。 实验材料 2.试管，三角烧瓶，量筒，玻璃棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，PH试纸，