结核杆菌（Mycobacterium tuberculosis）的特性和检测方法（2）.docxVIP

结核杆菌（Mycobacterium tuberculosis）的特性和检测方法（2） 五、结核杆菌毒力试验——动物试验法【材料】1. 动物：体重200~250克豚鼠2只　　2. 结核杆菌培养物或结核病人检验材料（痰、尿、粪、腹水等材料经浓缩集菌）　　3. 注射器及消毒用材料等。【方法】1. 选取结核菌素试验为阴性的豚鼠两只。　　2. 吸取结核杆菌悬液或病人检材，注入豚鼠腹股沟皮下0.1ml　　3. 注射后每周定期检查一次，观察豚鼠腹股沟淋巴结是否肿大，局部变硬，化脓及体重减轻、体温升高等症状。　　4. 给豚鼠作结核菌素试验，是否出现阳性结果。　　5. 6周后，将豚鼠进行解剖，观察淋巴结是否肿大，有无干酪性病变，肝、脾、肺等是否肿大，表面有无灰白色结节病灶，取可疑病灶进行涂片染色镜检和分离培养。若为阳性结果，可报告“动物接种后××天查到有结核菌感染”。如无症状及病变者，可报告为阴性。六、结核杆菌浓缩集菌法（以处理痰标本为例）【材料】结核病人24小时痰液，细口瓶，0.02%酚红液、汽油，NaOH，无菌生理盐水等。【方法】(一)漂浮法：1. 取24小时痰液15毫升，装入细口瓶内，加入2倍量0.5%NaOH摇匀，高压灭菌或煮沸20—30分钟杀菌。　　2. 待冷后加入汽油2毫升（二甲苯也可以），用力振荡20—30分钟，用生理盐水加至液面与瓶口齐，静置半小时。　　3. 取瓶口表面油状物涂于载物玻片上，微微加热，干后再加，如此重复5—6次，至厚度适宜，烘干待冷，抗酸染色，油镜头检查。(二)沉淀法：1. 取痰液1份或2倍量4%NaOH，高压无菌或煮沸20—30分钟后，加入0.02%酚红指示剂0.1毫升，剧烈振荡混匀，亦可置37℃水浴消化30分钟。　　2. 矫正PH为7.0，3000转/分离心30分钟，弃去上清液。　　3. 取沉淀物涂片染色镜检。若进行分离培养和动物接种，可免去高压灭菌或煮沸的程序。附录：抗酸染液的配制1. 石炭酸复红液：称取硷性复红4克，溶于95%酒精100毫升中成饱和液。再取饱和液10毫升与5%石炭酸溶液90毫升混匀即成。　　2. 3%盐酸酒精：取浓盐酸3毫升，95%酒 97毫升混合。　　3. 吕弗勒氏硷性美兰液：称取美兰2克，溶于95%酒精100毫升中，配成饱和液，取饱和液30毫升，再加入蒸馏水100毫升及10%氢氧化钾水溶液0.1毫升即成。