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组织学与胚胎学Histology and Embryology 第一章 组 织 学 绪 论 Introduction of Histology 组织学研究内容 组织学在医学中的地位 人体各部结构 （解剖和组织） 疾病时各结构的变化（病理学） 疾病时各结构功能的变化（病理生理学） 诊断学 内科学 外科学 儿科学 眼科学 妇产科学 人体各结构功能（生理与生化） 解剖学：肉眼-分辨率：0.1mm 意大利文艺复兴—达·芬奇，维萨利 1665 年, Robert Hook (英国人)-Cell 100年之久，石蜡切片术 — 微米（μm）0.2μm 组织学发展简史 1838年德国学者T.Schwan、M. Schleiden “细胞学说” 人体细胞约1×1015 细胞，200余种 1801年, Bichat (法国人)----组织（Tissue） Histology ：希腊文 组织：功能相关的细胞群和细胞外基质。 细胞— 组织— 器官 人体基本组织—上皮组织、结缔组织、肌组织及神经组织 二、组织学主要研究方法 （一）常用光镜标本制作技术 1.切片标本的制备 ２．涂片、铺片与磨片标本的制备 涂片 铺片 磨片 取材与固定： 固定使组织中蛋白质迅速凝固，防止组织自溶或腐败，以保持生活状态下的结构。常用的固定剂有甲醛、酒精等 脱水:上行梯度乙醇 透明:二甲苯 石蜡切片标本的制备 包埋：包埋前先浸入已融化的石蜡中使蜡进入组织中, 然后石蜡包埋。 切片和染色： 切片厚度 5-10μm, 苏木精（hematoxylin） 伊红（eosin） HE染色 HE染色原理: 苏木精为碱性染料，细胞核和细胞质中的核酸染成蓝紫色； 伊红为酸性染料，细胞质中的碱性蛋白和细胞外基质染成粉红色。 嗜碱性（basophilia） 嗜酸性（acidophilia） 封固： 火棉胶切片（celloidin section） 冰冻切片 (frozen section） 恒冷箱切片机（cryostat ） （二）电子显微镜技术 1932年，德国人Ruska和Knoll 发明了电子显微镜 测量单位：纳米（nm) 1nm=1/1000μm （获1986年诺贝尔奖） 分辨率：0.1-0.2nm 1. 透射电镜术（transmission electron microscope, TEM） 取材：极为新鲜；戊二醛、锇酸固定，超薄切片（50-100nm） 醋酸铀和柠檬酸铅电子染色 电子密度高 电子密度低 透射电子显微镜原理 透射电镜图像 2. 扫描电子显微镜 scanning electron microscope, SEM 极细的电子束在样品上扫描，产生的二次电子用探测器收集，形成电信号运送到显像管，在荧光屏上显示物体表面的立体图像。 戊二醛和锇酸固定，脱水、干燥和喷镀金 产生立体图像 扫描电子显微镜原理 （三）组织化学和细胞化学 原理: 在组织切片上加一定试剂，与组织或细胞中的待检物发生化学反应成为有色沉淀物，可用光镜检出。重金属沉淀可用电镜检出。此法可检测细胞内的酶类、糖类、脂类和核酸等 1. 糖类显示法: 最常用于显示细胞、组织内的多糖和蛋白多糖方法是过碘酸-雪夫反应（periodic acid Schiff reaction, PAS） 基本原理 糖被强氧化剂过碘酸（HIO4）氧化后，形成２-醛基；后者与Schiff试剂中的无色品红亚硫酸复合物结合，形成紫红色反应产物，PAS反应阳性部位即表示多糖的存在部位。 肠绒毛上皮中杯状细胞的PAS反应  （四） 免疫细胞化学 基本原理:根据抗原与抗体特异性结合的特点，检测细胞内某种多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子的存在和分布 荧光素（常用异硫氰酸）标记抗体 辣根过氧化物酶标记抗体 直接法和间接法 免疫组织化学方法 免疫组织化学（Sp法） 荧光免疫细胞化学技术 （五）细胞培养术（cell culture） 细胞培养又称体外实验（in vitro）。 无菌条件下将从机体取得的细胞模拟体内各种条件培养，可在倒置相差显微镜下观察和记录细胞的生活状态。 特点：可排除体内复杂的影响因素，观察单一因素对细胞形态和功能的影响，获得从体内实验难以达到的实验结果。 体外细胞培养 本章重点 组织学概念 石蜡切片制备基本过程 H