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实验十三 血清甘油三酯的测定 血清甘油三酯测定方法较多，但主要包括提取、吸附、皂化、氧化，还原及显色等步骤。近 年发展的酶学方法测定操作步骤虽然简单，但要许多纯酶制剂，此外还有光散射测定法，亦需要 特点器材，故不易推广使用，现介绍两种常用的方法： 一、酶法测定甘油三脂 【目的】 1. 熟悉酶法测血清TG的基本原理及注意事项。 2. 熟练进行实验操作。 3.了解TG测定主要临床意义。 【原理】 酶法测定是用脂肪酶或脂蛋白脂酶(LPL)使血清中甘油三酯水解，生成甘油和脂肪酸，甘油在 甘油激酶(GK)催化下，生成3-磷酸甘油，3-磷酸甘油在甘油磷酸氧化酶(GPOD)的催化下，生成磷 酸二羟丙酮和H O 。然后，以Trinder 反应测定H O ，计算血清甘油三酯含量。 2 2 2 2 甘油三酯 L P L 甘油+3 脂肪酸 甘油+ATP G K 3-磷酸甘油+ADP 3-磷酸甘油 GPO D 磷酸二羟丙酮+ H O 2 2 H O +酚+ 4 - 氨基安替比林 红色醌亚胺 + H O 2 2 2 【器材】 试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计。 【试剂】 甘油三酯试剂盒（3 ） 【操作】 加入物(ml) 测定管 标准管 空白管 血 清 0.01 — — 标准液(1.13mmol/L) — 0.01 — 酶试剂 1.0 1.0 1.0 混匀，置37℃水浴15min, 以空白管校“0”， 500 nm 波长比色， 取测定管光密度值。 【计算】 血清甘油三酯( mmol/L) = A /A ×1.13 R S 【正常参考范围】 正常参考范围： 0.56~1.70mmol/L 【注意事项】 1.配制后的酶试剂可在4℃存放4 天,几种酶中以甘油激酶较易失活。 2.标本应新鲜,血清放置时间长可使游离甘油浓度升高。 二、乙酰丙酮显色法 【目的】 1．了解乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯的原理； 2． 熟练进行实验操作。 3. 了解TG测定主要临床意义。 【原理】 血清中甘油三酯经正庚烷一异丙醇混合溶剂抽提后，用氢氧化钾溶液皂化成甘油，并进一步 用过碘酸氧化成甲醛，在NH4＋的存入下，甲醛与乙酰丙酮反应生成3,5—二乙酰—1,4—二氢二 甲基吡啶，后者为带荧光的黄色物质。与同样处理的标准液比色计算，即得血清中甘油三酯的含 量，反应式如下： 【器材】 试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计。 【试剂】 1、抽提剂：正庚烷/异丙醇＝2/3.5 （v/v） 2、0.04MH SO 2 4 3、异丙醇（A.R） 4、皂化试剂：取6.0gKOH 溶于60ml 蒸馏水中，然后取异丙醇40ml 混合，置棕色瓶中室温保 存。 5、氧化试剂：称取65mg 过碘酸钠溶于约50ml 蒸馏水，然后加入7.7g 无水醋酸铵溶解，再 6ml 冰醋酸，并加水至100ml。贮棕色瓶内室温保存。 6、乙酰丙酮试剂：0.4ml 乙酰丙酮加到10