DNA体外重组技术介绍PPT课件.pptVIP

2. DNA指导的DNA聚合酶活性；RNA酶H(3′→5′RNA外切酶)活性. 4. 反转录酶 功能： 后者可降解DNA-RNA杂交分子中的RNA 反转录酶缺乏3′→5′核酸外切酶活性,故未校正功能, 会出现错配. 应用 最主要是将mRNA逆转录为cDNA 三、DNA连接酶(DNA ligase) ——基因工程的缝纫针 催化双链DNA相邻碱基5′P和3′-OH间磷酸二酯键形成的酶。 T4噬菌体DNA连接酶----最常用 ①催化两个独立DNA片段(粘性末端和平末端) 5′P和3′-OH之间形成磷酸二酯键。 主要功能与用途： 催化平末端连接要比粘性末端 效率低得多。 ②修复双链DNA分子中单链缺口。 三、DNA连接酶(DNA ligase) 修复双链DNA分子中单链缺口,并可催化互补粘性末端的连接. 主要用于cDNA第二链的合成. 主要功能与用途： (二) 大肠杆菌DNA连接酶 连接粘性末端可代替T4 DNA连接酶. 四、其他修饰酶 功能： 催化多个脱氧核苷酸依次加到单链或双链DNA分子的3′-OH末端。 (一) 末端脱氧核苷酸转移酶(TdT) 用途： 1. 主要作用是在载体或目的基因 3′末端加上同源多聚尾巴，形成人工粘性末端，便于DNA重组。 2. DNA 3′末端的同位素标记。 催化DNA，RNA