生化-4DNA的紫外分光光度法定量测定-HZJ.pptVIP

实验四 质粒DNA的琼脂凝胶电泳DNA的紫外分光光度法定量测定 何振健 讲师 Zhenjian He, Ph.D, Lecturer 生物化学与分子生物学技术 一、重组质粒的酶切鉴定（琼脂糖凝胶电泳） 二、紫外分光光度法检测DNA含量 实验安排 DNA琼脂板倒胶 质粒DNA电泳（约1h） （10 μl）酶切操作、保温（1-3h） 质粒DNA提取原理与方法 质粒DNA提取实验操作 ( 约90m) 纯化的质粒DNA（20μl） 琼脂糖凝胶染色及结果观察 第五周 第六周 具体实验步骤 1、灌胶或倒胶； 2、胶凝固后，小心垂直向上拔出梳子，将凝胶置入电泳槽中，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2 mm； 3、加样：每排第一个孔加 DNA marker 10 μl （最后加） （酶切组：酶切质粒20ul，加入4μl loading buffer，混匀上样） (对照组：用酶切前的质粒10ul，加入2μl loading buffer，混匀上样，每组1个)； 4、接通电源，开始电泳（100V，60min）; 5、将凝胶置于紫外透射检测仪上，盖上防护观察罩，打开紫外灯，可见到发出荧光的DNA条带。 取酶切产物全部上样 1 4 3 2 5 6 7 1.5%胶，电泳（100V, 60min） 1：Marker 2：待测样品1 3：待测样品2 4: 待测样品3 5: 待测样品4