固相萃取柱知识点..-共15页.pdf

1、使用阳离子固相萃取柱前为什么要 用甲醇和水活化 要是使用的是高聚物基质的阳离子柱，可直接上样，不用活化， 要是使用的是硅胶基质的阳离子柱，活化是为了打开键合在硅胶上的 碳基团链，使之充分发生作用，甲醇是为了与碳链互溶，用水过度是 为了能和样品溶液相溶。 2、固相萃取技术原理及应用 一、固相萃取基本原理与操作 1、固相萃取吸附剂与目标化合物之间的作用机理 固相萃取主要通过目标物与吸附剂之间的以下作用力来保留/吸附的 1）疏水作用力：如C18、C8、Silica、苯基柱等 2）离子交换作用：SAX, SCX，COOH、NH 等 2 3）物理吸附：Florsil、 Alumina等 2、p H值对固相萃取的影响 pH值可以改变目标物/吸附剂的离子化或质子化程度。对于强阳/阴离子 交换柱来讲，因为吸附剂本身是完全离子化的状态，目标物必须完全离 子化才可以保证其被吸附剂完全吸附保留。而目标物的离子化程度则与 pH 值有关。如对于弱碱性化合物来讲，其pH 值必须小于其pKa 值两 个单位才可以保证目标物完全离子化，而对于弱酸性化合物，其pH值 必须大于其 pKa 值两个单位才能保证其完全离子化。对于弱阴/阳离子 交换柱来讲，必须要保证吸附剂完全离子化才保证目标物的完全吸附， 而溶液的pH值必须满足一定的条件才能保证其完全离子化。 3、固相萃取操作步骤及注意事项 针对填料保留机理的不同（填料保留目标化合物或保留杂质），操作稍 有不同。 1）填料保留目标化合物 固相萃取操作一般有四步（见图1）： Ø 活化 除去小柱内的杂质并创造一定的溶剂环境。（注意整 个过程不要使小柱干涸） Ø 上样 将样品用一定的溶剂溶解，转移入柱并使组分保留在 柱上。（注意流速不要过快，以1ml/min为宜，最大不超过5ml/min） Ø 淋洗 最大程度除去干扰物。（建议此过程结束后把小柱完 全抽干） Ø 洗脱 用小体积的溶剂将被测物质洗脱下来并收集。（注意 流速不要过快，以1ml/min为宜） 如下图1: 2）填料保留杂质 固相萃取操作一般有三步（见图2）： Ø 活化--除去柱子内的杂质并创造一定的溶剂环境。（注意整个过 程不要使小柱干涸） Ø 上样--将样品转移入柱，此时大部分目标化合物会随样品基液流 出，杂质被保留在柱上，故此步骤要开始收集（注意流速不要过快） Ø 洗脱用小体积的溶剂将组分淋洗下来并收集，合并收集液。（注 意流速不要过快） 此种情况多用于食品或农残分析中去除色素。 如下图2： 二、固相萃取方法的建立与优化 固相萃取技术使用起来虽然比液液萃取简单，但建立一个固相萃取的方法并无快捷方式可 走。建立固相萃取方法必须考虑与萃取过程相关的多种因素，归纳起来可通过下图来了解： 方法建立如下图片1.jpg： 方法建立如下图片2.jpg： 1、初步固相萃取方法的建立 建立初步的萃取方法要考虑: ·选择合适的SPE柱 ·选择合适的固相萃取方法 ·方法的优化 2、固相萃取柱的选择 1）柱填料的选择 首选根据目标化合物与干扰物的差异，如极性，分子量，pka值等，选择合适的填料。 固 相 萃 取 柱 的 选 择 如 下 图 片 . j p g ： 2）固相萃取柱规格的选择对于反相、正相和吸附型固相萃取柱来说，被萃取样品的质量不 超SPE柱填料的5%（参考值，同一种SPE柱对不同的目标物选择性不同，吸附容量不同）； P 0cm=0cm 0cm? 0pt?离子交换型的固相萃取柱，必须考虑离子交换的容量。不同厂家 的小柱离子交换容量稍有差异。下表附SPE小柱的容量和洗脱参数 SPE柱上样容量和洗脱体积的选择 规格 最大上样量 最小洗脱体积 100mg/1mL 5mg 250µL 200mg/3mL 10mg 500µL 500mg/6mL 25mg 1.2mL 1g/6mL