蛋白质的纯化与鉴定.pptVIP

疏水层析亦称疏水作用层析(hydrophobic interaction chromatography，HIC)，它也属于吸附层析一类, 通过表面疏水性的差异来分离蛋白质的柱层析方法。 一、疏水层析的原理 第86页，共110页，编辑于2022年，星期六 不同蛋白质表面及内部疏水区的多少、大小、强弱、分布及空间位阻效应各不相同，这也是HIC分离蛋白质的根本所在。 在20种氨基酸中有8种是疏水性氨基酸，其强弱顺序为Tyr、Ile、Phe、Pro、Val、Leu、Met、Ala。 第87页，共110页，编辑于2022年，星期六 第88页，共110页，编辑于2022年，星期六 （一）疏水作用 蛋白质与固定相结合原理 蛋白质表面存在的疏水补丁 蛋白质发生（局部可逆性）变性时，原本隐藏于分子内部的疏水残基暴露至分子表面 疏水层析的特性：即在高盐浓度下，暴露于分子表面的疏水残基容易与疏水性固定相结合 洗脱原理 通过降低流动相的离子强度，将结合于固定相的物质按结合能力的大小依次洗脱下来（疏水作用弱的物质先被洗脱下来，随着离子强度的进一步降低，结合能力强的物质也被逐渐洗脱） 第89页，共110页，编辑于2022年，星期六 （二）吸附剂 根据基质的性质不同分为： 1.亲水性吸附剂：目前这类吸附剂主要是交联琼脂糖（Sepharose）, 配体有