细菌鉴定中常用的生理生化反应.pptx

细菌鉴定中常用的生理生化反应;一、实验目的;三、实验器材;培养基 糖发酵培养基，用于糖类发酵试验 葡萄糖蛋白胨水培养基，用于甲基红和V．P试验 蛋白胨水培养基，用于吲哚试验 柠檬酸铁铵或醋酸铅的半固体培养基，用于硫化氢试验 柠檬酸钠培养基，用于柠檬酸盐利用试验;三、实验方法及原理; 糖(醇)类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶，因而发酵糖(醇)的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先加入溴甲酚紫[pH5．2(黄色)一6．8(紫色)]，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。; 糖(醇)类发酵试验 （1）编号 在各试管上分别标明各种糖名称，所接种的菌名和组号，下同。 （2）接种 （3）培养 将已接种好的培养基置37℃温箱中培养24h。 （4）观察结果 ;（4）观察结果： 被检细菌若能发酵培养基中的糖时，使培养基的pH降低，培养基中的指示剂为黄色； 若发酵培养基中的糖产酸产气，则培养基不仅显黄色，并且在培养基中倒置的小玻璃管(杜氏小管)中有气体。 若被检细菌不分解培养基中的糖，则培养基不发生变化。;实验结果; 甲基红(Methylred)试验(简称MR试验) 某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸， 丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳 酸等，使培养基的pH降低到4．2以 下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。 因甲基红指示剂变色范围是 pH4．4(红色)～pH6．2(黄色)。;方法 将待检菌分别接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，37℃培养 48h，加甲基红指示剂数滴，观察结果，呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。;伏一普二氏试验(V．P．试验);方法 将被检菌接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，37℃培养48h，取出，加入40％KOH 5～10滴，然后再加入等量的5％?一萘酚溶液，用力振荡，再放入37℃温箱中保温15～30min，以加快反应速度。若培养物呈现红色，为伏—普反应阳性。; 靛基质(吲哚)试验 某些细菌能分解蛋白质中的色氨 酸，产生靛基质(吲哚)，靛基质与对 二甲基氨基???甲醛结合，形成玫瑰色 靛基质(红色化合物)。; 方法： 将被检菌接种到胰蛋白胨水培 养基中，37℃培养24h～48h后， 沿试管壁滴加数滴吲哚试剂于培 养物液面，观察结果。 结果： 出现红色者为阳性 出现黄色者为阴性。; 硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸 (胱氨酸、半胱氨酸等)，产生硫化 氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁 盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。 为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细 菌。 ;方法 将待检菌以接种针 穿刺接种到醋酸铅或柠 檬酸铁氨培养基中， 37℃培养24h，观察结 果，若有黑色出现者为 阳性。; 柠檬酸盐利用试验 柠檬酸盐培养基中柠檬酸钠为碳的唯 一来源。有的细菌能利用柠檬酸钠为碳源，因 此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸 盐后产生碳酸钠，使培养基变为碱性。此时培 养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝 色（变色范围：pH6.0～ pH7.6）。 不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌，在该培养 基上不生长，培养基不变色。; 方法 取少量被检菌接种到柠檬酸盐培养基上，37℃培养24h后，观察结果。培养基变深蓝色者为阳性。培养基不变色，则继续培养7天，培养基仍不变色者为阴性。;谢谢大家！