拟南芥培养学习.docVIP

实验目的：拟南芥无菌培养。 实验仪器：光照培养箱,盆.培养皿,超净台,灭菌锅. 实验试剂：营养土,蛭石,MS培养基 实验步骤： 配制MS培养基（一般装在三角瓶里，最好只装最大体积的70％以内），高温灭菌（115度15分钟）在未固化情况下，（固化的话可以在微波炉里融化再使用）在超净台里倒入培养皿（一般一个培养皿内装25ml左右培养基，培养皿也是要灭菌的，一般用报纸或者牛皮纸包一排，十几个吧），待充分凝固之后平放密封保存（倒好之后最好静置15－20分钟，然后放在塑料袋里，保存在4度） 将拟南芥种子用10％消毒水（洗洁精体积分数）浸泡15分钟左右（要保证每粒种子都浸透），无菌水冲洗3遍，加入适量0.12%的琼脂溶液（要灭菌的）用蓝枪头播在之前准备的灭菌MS固体培养基上(要在超净台中操作)，点种子大概的确有点难以想象，下次你来拿种子和苗的时候我可以给你演示一下； ４℃春化2天后转到光照培养间，温度２２℃／１８℃（日／夜），1６ｈ／８ｈ光周期，白炽灯光照培养，光照强度五千Lx 大约7－10天后，拟南芥根须和芽均已长出，长到3至4片叶后可以移入土中培养（平板里长太久的话似乎会影响植物以后的生长）。 用营养土和蛭石以1：1的比例混合拌匀配制，以保证营养及透气性。用高温杀菌以杀死土中的害虫。（我们现在种得多，土都不灭菌的，注意拔拔杂草就行了） 用镊子小心夹住培养皿中的拟南芥茎处，取出放在土上，卷起根须塞入土中。避免将叶片带入土里。放在光照培养间，条件和长平板一样就行了 在托盘中浇水，通过毛细作用由底部的孔吸收上去，保证土壤湿润。刚移植的前两天可以用基本上透明的盖子盖住盆顶。 MS培养基的配方是对的 单位mg/L 　　大量元素：NH4NO3 1 650 　　KNO3　1 900 　　CaCl２·2H2O 440 　　MgSO4·7H2O 370 　　KH2PO4 700 　　微量元素：KI 0.83 　　H3BO3 6.2 　　MnSO4·4H2O 22.3 　　ZnSO4·7H2O 8.6 　　Na2MnO4·2H2O 0.25 　　CuSO4·5H2O 0.025 　　CoCl2·6H2O 0.025 　　FeSO4·7H2O（27.8）+Na2-EDTA·2H2O（37.3） 　　有机成分：肌醇 100 　　烟酸 0.5 　　盐酸吡哆醇（维生素B6） 0.5 　　盐酸硫胺素（维生素B1） 0.5 　　甘氨酸 2 注意：肌醇一般是要另外分开来独自配成浓缩液，因为它比较难溶，一般配成100倍，而除去肌醇后的有机，还是可以配成1000倍的。 要加1.2%的琼脂，才能凝固