2022届高考生物一轮复习课件：实时荧光定量PCR1（知识精讲+思维导图）.pptxVIP

实时荧光定量PCR5‘--3‘RQ-3‘3‘--5‘新冠病毒核酸检测需要扩增后检测新冠病毒RNA的量太少无法检测出来检测是否有新冠病毒RNAPCR只能扩增双链DNA咽拭子采样将新冠病毒的RNA通过逆转录后形成DNAPCR扩增逆转录后的DNA检测实时荧光定量PCR可以在扩增DNA的同时进行检测。实时荧光定量PCR所谓“实时荧光定量PCR” 是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号出现的先后顺序及信号强弱的变化来即时分析模板DNA的拷贝数目，通过与加入已知量的标准品进行比较较，可实现实时定量。这只是为实时荧光定量PCR做一个开场白，如果想详细了解其原理，请往后看。一、PCR扩增过程中荧光信号强度变化的变化规律1.用荧光标记扩增产物，随着循环次数的增加，荧光信号逐渐增强，如图所示。荧光值循环数一、PCR扩增过程中荧光信号强度变化的变化规律2.荧光信号变化规律Taq酶活性下降引物浓度下降原料P浓度下降平台期①早期:扩增产物较少，荧光信号不易检测到②指数期:荧光值随循环次数增加呈指数增加。荧光值线性期指数期③线性期:荧光值随循环次数增加呈线性增加。早期④平台期:荧光值随循环次数增加几乎不增加。二、相同DNA模板，在同一台PCR仪器上重复扩增曲线图通过重复扩增曲线发现，在指数期的早期，重复实验的结果是一致。荧光值循环数三、荧光阈值在荧光扩增曲线的指数增长期的早期，认为设定一个荧光强度标准，