PCR扩增的原理及过程.pdfVIP

PCR扩增的原理及过程 该技术模拟体内天然 DNA 的复制过程，其基本原理是在模 板、引物、4种dNTP和赖热DNA聚合酶存在的条件下，特 异扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的酶促合成反应。 每一循环包括高温变性、低温退火、中温延伸三步反应。每 一循环的产物作为下一个循环的模板，如此循环 30 次，介 30 于两个引物之间的新生DNA片段理论上达到2 拷贝（约为 10 个分子）。PCR技术的特异性取决于引物与模板结合的特9 异性。 PCR 由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： ① 模板DNA 的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时 间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离， 使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； ② 模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性 成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补 序列配对结合； ③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的 作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对 与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保 留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多 的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模 板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目 的基因扩增放大几百万倍(Plateau)。 到达平台期所需循环 次数取决于样品中模板的拷贝。在此同时认识到蛋白质是接 受RNA 的遗传信息而合成的。