海洋生物技术：海藻酸钠包埋固定酵母发酵.docVIP

PAGE 课程名称 海洋生物技术 教学内容 （项目) 实训三 海藻酸钠包埋固定化酵母细胞发酵 授课进度 第五,六次授课 教学日期 及课节 第五,六周 星期三第 3-4 节 共（4）学时 教学地点 实训室 教学目标 熟练掌握海藻酸钠包埋固定化酵母细胞发酵技术 教学重点 学习掌握酵母的活化方法；能探索适合的海藻酸钠及硬化剂浓度，能成功制作出包埋小球 教学难点 探索适合的海藻酸钠及硬化剂浓度，能成功制作出包埋小球 学情 在蓝色经济与海洋+背景下，学生们对海洋生物技术很感兴趣。 教学设计 教学环节 时长 （分钟） 教学过程及内容设计 教学方法 学习任务一 45分钟 任务一、海藻酸钠凝胶的制备 一 原理 固定化细胞即利用物理或化学方法将细胞固定在一定空间的技术。细胞中含有一系列酶，在细胞正常生命活动的过程中，通过代谢产生所需要的代谢产物。 固定化细胞常用不溶于水的多孔载体如明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺等 二 器材与试剂 酵母，无水CaCl2，海藻酸钠，玻璃棒，200mL烧杯，0.4%台盼兰染液100毫升 三 实训步骤 1 酵母的活化：取1g干酵母，放入50ml的小烧杯中，加入蒸馏水10ml，用玻璃棒搅拌，使酵母细胞混合均匀，成糊状，放置1h左右使其活化 2 配制浓度为3%的CaCl2溶液100毫升，使其充分溶解，待用。 3 配制海藻酸钠溶液（3-7%请学生实验最佳浓度）：称取0.5g海藻酸钠，放入50mL小烧杯中.加人10mL水，用酒精灯加热，边加热边搅拌，将海藻酸钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容至10mL。注意，加热时要用小火，或者间断加热，反复几次，直到海藻酸钠溶化为止。海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量。如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。 演示法；讨论法；操作法 学习任务二 细胞活力测定 30分钟 任务二、固定化酵母细胞 4 海藻酸钠溶液与酵母细胞混合：将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入已活化的醉母细胞，进行充分搅拌，使其混合均匀，再转移至注射器中。 5 固定化酵母细胞：以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，观察液滴在CaCl2溶液中形成凝胶珠的情形。将这些凝胶珠在CaCl2溶液中浸泡30 min左右。 刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形成稳定的结构。检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下列方法： 一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的。 观察凝胶珠的颜色和形状: 如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。 6 发酵：将固定好的酵母细胞(凝胶珠)用蒸馏水冲洗2-3次。将150mL质量分数为10%的葡萄糖溶液转移到200mL的锥形瓶中，再加入固定好的酵母细胞，置于25℃下发酵24h。观察发酵的葡萄糖溶液：利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了很多气泡，同时会闻到酒味。还有其他方法吗？ 任务三、细胞活力测定（约30分钟） 细胞活力测定步骤 1、将细胞悬液以0.5ml加入试管中。2、加入0.5ml 0.4%台盼兰染液，染色2一3分钟。3、吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。4、镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数，计细胞活力。死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。 多媒体教学；讲授法 交流总结 15分钟 四 思考：固定化酵母细胞发酵的优点 各个实训小组间交流实训结果，讨论心得体会。 讲授法；讨论法 教学意见及建议： 《海洋生物技术》是一门理实一体化的专业课程，采用多媒体教学、讲授法、研讨法、直观教学。采用工作任务驱动，项目导向的案例教学法，引导式教学法体现在实训设计中，分小组制定学习任务，有意识地培养学生的团队合作精神，强调组内合作，资源共享，成果共享。 授课教师签字： 提示：请您根据《课程标准》、《课程教学进度表》在上课前完成教案，并在上课前做好教学仪器设备准备和课后CRP教室日志的填写工作。