海洋生物技术：海洋生物细胞培养.docVIP

第 PAGE 1 页 共 NUMPAGES 5 页 第二节 海洋生物细胞培养 课时：2 【实训内容】　 1．什么是海洋生物细胞工程 2．技术应用 3. 技术内容 【实训目的】 　1.了解海洋生物细胞工程的含义 2.掌握海洋生物细胞工程的技术内容3. 熟悉海洋生物细胞工程的应用 【实训重、难点】 １．海洋生物细胞工程的技术内容，原代和传代。　　２．海洋生物细胞工程的应用范畴，重点是在制药工业中的应用 【教学方式、方法】 多媒体教学法?、互动法、情境实训法、课内外结合法、任务驱动法。 【课前准备】 １.课件　　２.教案 教学内容 课的内容及要求 课的组织与实施（包括教学设想、师生互动、问题引导、时间安排、教学方法等） 细胞工程是将一种生物细胞中携带的全套遗传信息的基因或染色体整个导入另一种生物细胞，从而改变细胞的遗传性，创造新的生物类型。细胞工程的优势在于避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作，只需将细胞遗传物质直接转移到受体细胞中就能够形成杂交细胞，因而能够提高基因的转移效率。此外，细胞工程能打破只有同种生物杂交才能育种的限制，实现了种间亦可育种的突破，这对于创造动物、植物、微生物新品种以及在医学领域都具有重要的应用价值。 第一节 海洋生物细胞培养技术 21世纪是生命科学的世纪，也是海洋科学的世纪。随着生命科学理论和技术的飞速发展，细胞培养技术的地位和作用也越来越突出了，哺乳动物细胞培养的研究起步较早，目前已经取得了丰硕的成果，而水生动物特别是鱼类细胞培养的研究起步较晚，相对来说是比较滞后的，但是其发展也是非常迅猛的，并且有着广阔的应用前景。 细胞培养技术是生命科学中常用的研究手段，已经成为当今生命科学各研究领域的基础技术和基本技能，同时细胞培养技术又是细胞工程、基因工程和生物医学工程的重要研究手段。肿瘤、感染、创伤和器官移植等问题的研究，也都与细胞培养技术有关。进行细胞培养研究的水生动物主要包括水生无脊椎动物和水生脊椎动物。水生无脊椎动物的细胞培养比较困难，原代培养细胞不能形成单层或即使形成单层但细胞不分裂而难以进行传代。因而至今没有得到水生无脊椎动物的连续性细胞系。水生脊椎动物细胞培养的主要研究对象是鱼类。鱼类细胞的短期培养并不难，但要建立永久性连续细胞系却不容易。现在普遍认为第一个真骨鱼类永久性细胞系?—虹鳟性腺细胞系（RTG-2）是由Wolf和Quimby于1962年建立的。此后，鱼类细胞培养研究的进展十分迅速。据Fryer等统计，截止到1994年，至少已经建立了159株鱼类的细胞系。我国对鱼类细胞培养的研究起始于20世纪70年代，迄今已经建立了20多株细胞系。 一 鱼类细胞培养的方法与技术 ﹝一﹞鱼类细胞培养基的选择 　　鱼类细胞培养所用的培养基主要是合成培养基，常用的有以下几种：Eagle′s MEM、Leibowitz L-15、M199和M1640。Eagle′s MEM适用于多种细胞的生长培养，如CCO、AS、CHSE-214、RTG-2等，还可以通过在其中添加或减少某些成分用于特殊研究的细胞培养，是一些海水鱼类细胞系培养常用的培养基；M199所含的营养成分丰富而且全面，可以在细胞培养中用作维持液，可以使一些细胞的存活时间达到33天，是一些淡水鱼类细胞系常用的培养基；Leibowitz L-15曾在中国对虾的原代培养和野鲮（Labeo rohita）、印鲮（Cirrhina mrigala）、蟾胡子鲶（Clarias batrachus）、囊鳃鲶（Heteropneustes fosibis）等淡水鱼类的鳃、鳍组织的细胞系建系上进行了尝试；RPMI-1640常用于人类肿瘤（癌）细胞的培养，也常用于培养鱼类的淋巴细胞。曾令兵等用Hank′s液配制了一种廉价的CAS培养基对CIK细胞进行了大规模的细胞培养，收到了很好的效果。在对鱼类组织进行细胞培养时，要根据不同种类的鱼选择适合其生长的培养基。在培养海水鱼类细胞时，要在培养基中加入适当量的NaCl，以维持渗透压，但是NaCl的浓度不能太高，太高会不利于细胞生长。 ﹝二﹞鱼类组织或细胞的来源?　　鱼类的很多组织和器官均可用于进行细胞培养，但比较常用的是鱼类的胚胎组织和幼鱼的组织器官。由于这些组织和器官的分化程度低，分裂潜能大，所以是用于鱼类原代细胞培养的最佳材料。成鱼的性腺、肾、心、鳔、脾脏、鳍条、吻端等也是常用的培养材料，尤其是性腺与肾脏应用最广泛。 ﹝三﹞鱼类细胞培养的方法与技术 　　鱼类细胞培养的方法和技术一般是借用哺乳动物细胞培养的方法与技术。 　　⒈ 原代细胞培养 　　目前较常用的原代培养的方法是：组织块法、机械分散法、络合剂分散法和酶消化法。 　　组织块法：当组织量较少时可