海洋生物技术：海洋微生物培养的新方法.pptxVIP

海洋微生物的分离主要内容任务一海洋微生物的分离任务二微生物的培养技术任务三海洋微生物培养的新方法任务三、海洋微生物培养的新方法经典的平板培养方法不适于海洋微生物的培养，新方法多采用稀释的培养基或模拟自然环境直接用无菌海水进行培养。稀释培养法海洋微生物目前获得纯培养的不到1%，由于海洋环境中主要是寡营养微生物，在实验室培养时，高浓度的营养可能对寡营养微生物具有抑制作用。1993年，Button等提出一个崭新的方法，即稀释培养法（Dilution culture），来解决这个问题。先将海洋微生物群落计数后再稀释，接种于灭菌海水中培养。九周后用流式细胞仪检测，发现微生物细胞的浓度可达到104个/ml，细胞的倍增时间为一天到一周。高通量培养法2002年，Connon等提出了高通量培养法（High-throughput culturing）。他们将样品浓度稀释至103个/ml后，采用48孔细胞培养板分离培养微生物。通过这种方法可培养出高于传统微生物培养技术所培养的微生物数量。扩散盒培养法模拟海洋微生物生长的自然环境。Kaeberlein 等设计了一种培养装置-扩散盒（diffusion chamber）。由一个环状的不锈钢垫圈和两侧胶连的 0.1 μm 滤膜组成。将海洋微生物样品加至封闭的扩散盒中，在模拟采样点环境条件的玻璃缸中进行培养。扩散盒的膜可使化学物质在盒内和环境之间进行交换，但是细胞却不能自由移动。优点：模拟微生物所处的自然环境，由于化学物质可自由穿膜，可保证微生物群落间作用的存在，从而提高了微生物的可培养性。微囊包埋法微囊包埋法是海洋微生物的另一种高通量分离培养技术。先将海水和土壤样品中的微生物进行稀释培养，然后将稀释到一定浓度的菌液与融化的琼脂糖混合，制成包埋单个微生物细胞的琼脂糖微囊，然后将微囊装入凝胶柱内，用培养液进行流动培养。凝胶柱进口端用0.1μm滤膜封住，防止细菌的进入而污染凝胶柱；出口端用8μm滤膜封住，防止微囊随培养液流出。该技术将琼脂糖包埋培养与流式细胞仪筛选结合起来，这样就可以增加细胞检测的灵敏度，缩短低生长率细胞的培养时间。根据微生物自身特性的培养方法海洋微生物中一些迄今未获得纯培养的进化枝具有与众不同的代谢途径，我们可以根据其独特的代谢途径将这些微生物培养出来。例如，Konneke等发现海洋泉古菌门的古菌可以氧化铵来产生能量，从而采取了通过抗生素排除其他海洋微生物并在培养基中添加铵的培养策略，最终获得了海岸亚硝化侏儒菌SCM-1的纯培养，这是海洋泉古菌门I组的古菌第一次获得纯培养。Thank you