大肠杆菌、质粒和噬菌体.pptVIP

噬菌体概述 噬菌体：感染细菌、真菌、放线菌 或螺旋体等微生物的细菌 病毒总称 结构：无尾部结构的二十面体型 具尾部结构的二十面体型 线状体型 核酸类型：双链线性DNA 双链环形DNA 单链环形DNA 单链线形DNA 双链RNA 单链RNA 第六十页，共九十四页。 第六十一页，共九十四页。 分子量： 不同的噬菌体之间的核酸分子量的差异比较大 大分子量的噬菌体生命周期比较复杂，对寄主的依赖性较低 碱基组成： 有些噬菌体的DNA碱基不是由标准的A/T/C/G组成的 T4噬菌体DNA没有C，取代的是5-羟甲基胞嘧啶（HMC） SP01噬菌体DNA中没有T，取代的是5-羟甲基尿嘧啶（HMU） 噬菌体概述 第六十二页，共九十四页。 噬菌体的一般生物特性 可脱离寄主细胞生存，但不能进行复制。除了对寄主的依赖性，还可保护自己的核苷酸分子（DNA/RNA）免遭环境化学物质的破坏 第六十三页，共九十四页。 λ噬菌体：基因组 长尾噬菌体科，温和噬菌体 ◆一般结构：48,502bp，线状dsDNA。 ◆ 46个基因，分为四类： 调控基因：CⅢ、N、CI、Cro、CⅡ，决定进入溶源化或裂解状态 DNA复制：O、P、Q λ重组：int、xis、redβ和gam 噬菌体颗粒形成与细胞裂解：头(A-F)、尾(E-J)、S R （细胞裂解）、λ中部约1/3的DNA(b2)与λ存活无关。 第六十四页，共九十四页。 线状ds-DNA两端具有12nt 5’-突起，称为cos位点，被λ编码的末端酶所识别，通过粘性末端的互补作用形成双链环形DNA。 第六十五页，共九十四页。 DNA Protein coat cos cos Nonessential region Long (left) arm short (right) arm Exogenous DNA (~20-23 kb) λ phage 12bp 第六十六页，共九十四页。 代表性细菌质粒（2）： R因子（resistance），抗药因子，带R因子的细菌有大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、绿脓杆菌等G-菌，60-90%的G-菌耐药性由R因子转移。 R因子是细胞质粒，使寄主菌对链霉素、氯霉素、四环素等抗菌素或磺胺剂产生抗药性的基因群。和F因子一样，通过接合进行转移，获得该因子的细菌获得对多种药剂的抗性，给治疗带来很大麻烦。 环状dsDNA，包括抗性转移因子和抗性决定因子，R因子在细胞内的copy数从1-2个到几十个，分为严紧型和松弛型，经氯霉素处理，松弛型质粒可达2000-3000个/细胞。 R因子（resistence factor） 第二十八页，共九十四页。 代表性细菌质粒（3）： Col因子，产大肠杆菌素因子，编码合成大肠杆菌素, 通过抑制复制、转录、转译或能量代谢而专一性地杀死不含Col因子的其他肠道细菌。 Col因子可分为两类： ColE1：无接合作用，松弛型多copy；用于重组DNA研究和体外复制系统。 ColIb：与F因子相似，通过接合作用转移，严紧型控制，只有1-2个copy。 Col 因子（colicinogenic factor） 第二十九页，共九十四页。 真核生物DNA质粒 环状DNA质粒：酵母质粒，植物线粒体中的环状DNA质粒，人和动物的核DNA质粒等，都是不知其功能的隐蔽质粒。 线状DNA质粒：乳酸克鲁维酵母的嗜杀线状DNA质粒，植物线粒体中与雄性不育有关的线状DNA质粒。 真核生物RNA质粒 有壳体的dsRNA质粒：由蛋白质壳体包裹，存在于某些真菌和植物细胞中，由于它们酷似病毒，所以也常被称作真菌病毒和植物隐蔽病毒，或称类病毒颗粒，典型代表是酿酒酵母的嗜杀dsRNA质粒。与RNA病毒的主要区别是它们不具有感染性． 无壳体的dsRNA质粒：存在于脂质小囊中的栗疫菌减毒dsRNA质粒，玉米线粒体中与雄性不育有关的dsRNA质粒。 第三十页，共九十四页。 把目的基因通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。 基因工程所用的vector实际上是DNA分子，携带目的基因片段进入受体细胞的DNA。 作为载体的质粒大多是