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* 培养基灭菌方法 -------湿热灭菌法 培养基湿热灭菌最少时间 液体容积（ml） 121℃所需时间（min） 20---50 15 75 20 250---500 25 1000 30 1500---2000 35---40 第31页，共51页，编辑于2022年，星期一 * 培养基高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）操作 P20 灭菌后培养基的存放： 锅内加水 放入消毒桶 装入培养基 盖好锅盖 接通电源加热 排尽锅内冷空气 达到灭菌温度时开始计时并保持足够长的时间 继续加热 切断电源 压力表指针归零时打开锅盖 取出培养基并存放好 第32页，共51页，编辑于2022年，星期一 * 高压蒸汽灭菌锅安全使用注意事项： ① 灭菌前外层锅内要加入足够的水,灭菌完成后要将锅内的水排放干净。 ② 在灭菌过程中及灭菌后，压力表压力指针归零之前,不能打开锅盖,以免发生危险。 ③ 注意日常维护和检查,及时发现问题,及时修理，保证使用安全可靠。 第33页，共51页，编辑于2022年，星期一 * 使用高压蒸汽灭菌锅进行物品灭菌时的注意事项： ① 消毒锅内放置的物品要有一定的缝隙，便于高温蒸汽上下回流，达到良好灭菌效果。 ② 锅内冷空气必须完全排尽，否则压力表的指针虽然达到了规定的压力，但由于锅内冷空气的存在，并不能达到相应的温度，因而影响灭菌效果。 ③ 进行培养基灭菌时，锅内达到规定的灭菌温度后，在严格保持灭菌温度的同时，还要严格保持灭菌时间。时间过长会破坏培养基内一些化学成分的有效性，时间过短则达不到灭菌效果。 第34页，共51页，编辑于2022年，星期一 * 2.3.2.3 无菌操作室内的灭菌方法 熏蒸灭菌法 射线灭菌法 2.3.2.4 外植体的表面灭菌 P29 化学消毒剂灭菌法 抗生素抑菌法 第35页，共51页，编辑于2022年，星期一 * 1.外植体灭菌的常用杀菌剂 良好的外植体灭菌效果的含义： 外植体灭菌后无菌率高，同时植物细胞不会受损伤或只是轻微受损伤而能保持正常生长。 第36页，共51页，编辑于2022年，星期一 * 2.外植体表面灭菌 外植体表面灭菌操作前的准备工作： ① 无菌水、漂洗瓶、切割用器皿（玻璃培养皿或不锈钢切割盘）和金属器具均经过高温高压灭菌并整齐摆放在超净工作台上。 ② 灭菌剂配制好并整齐摆放在超净工作台上。 第37页，共51页，编辑于2022年，星期一 关于植物组织培养园艺 第1页，共51页，编辑于2022年，星期一 * 2.1.1.2 无菌操作室 ⒈功能 ⒉组成 缓冲室（间）： 接种室（间）： ⒊无菌操作室的消毒 ⒋主要设备 超净工作台 金属器械消毒器 第2页，共51页，编辑于2022年，星期一 * 2.1.1.3 培养室 功能 主要设备 环境条件 第3页，共51页，编辑于2022年，星期一 * 2.1.1.4 温室 功能 第4页，共51页，编辑于2022年，星期一 * 2.1.2 组培实验室的布局 2.1.2.1 布局基本要求 便于隔离，便于操作，便于灭菌和便于观察。 2.1.2.2 基本布局规律 根据实验操作程序排列实验室； 接种室和培养室设在与外界环境隔离性好的区域； 灭菌室与接种室相邻； 其他实验室的布局可根据条件，以方便使用为宜。 第5页，共51页，编辑于2022年，星期一 * 培 养 室 准 备 室 灭菌室 储藏室 接种室 缓冲室 植物组织培养实验室布局示意图 第6页，共51页，编辑于2022年，星期一 * 2.1.2.3 设计组培实验室时的注意事项 为了减少污染，实验室最好设一走廊且走廊上方最好安装紫外灯； 培养室最好设在南面，设大玻璃窗，以双层玻璃窗为最好。如果培养室是设在房屋的边侧，其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗； 培养室房间及门要小，而且密闭性要好，最好装移门； 无菌操作室要小，要设缓冲间，也最好装移门，且门要稍大一些。 第7页，共51页，编辑于2022年，星期一 * 2.1.3 组培实验室的基本设备 2.1.3.1 器皿和器械类 ⒈玻璃器皿 ⒉器械 镊子类 解剖刀 剪刀 接种针 细菌过滤器 第8页，共