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实时荧光定量per实验报告 篇一:实时荧光定量PCR方式简介 实时荧光定量PCR方式简介 实时荧光定量PC R的大体原理 理论上，PCR进程是依照2n （ n代表PCR循环的次数）指数的方式 逬行模板的扩増。但在实际的PCR反映进程中，随着反映的进行由于体 系中各成份的消耗（主若是由于聚合酶活力的衰减）使得靶序列并非按指 数方式扩增，而是按线性的方式増加进入平台期。因此在起始模板量与终 点的荧光信号强度间没有靠得住的相关性。如采纳常规的终点检测法（利 用EB染色来判定扩増产物的多少,从而间接的判定起始拷贝量）,即便起 始模板量相同经PCR扩増、EB染色后也完全有可能取得不同的终点荧光 信号强度。 为了能准确判定样品中某基因转录产物（mRNA ）的起始拷贝数，实 时荧光定量PCR采纳新的参数——Ct值，定量的全然原理是Ct值与样 品中起始模板的拷贝数的对数成线性反比关系。 Ct值是如何取得的 在实时荧光定量PCR的进程中，靶序列的扩増与荧光信号的检测同 时进行，定量PCR仪全程搜集荧光信号，实验终止后分析软件自动按数 学算法扣除荧光本底信号并设定阈值从而取得每一个样品的Ct值。 Ct值的概念 Ct值中的C〃代表Cycle （循环），〃t〃代表检测 threshhold （阈值）,其含义是PCR扩増进程中荧光信号强 度达到阈值所需要的循环数；也能够明白得为扩増曲线与阈 值线交点所对 应