核酸的分离与纯化.pdfVIP

第六章核酸的分离与纯化 ■ • 第 节核酸分离与纯化的设计与原则 细 胞 内 的 核 酸 括 DNA 与 RNA 两种分子，均与蛋白质结合成核蛋白 ( ) DNA （ , nucleoprotein 。 与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白 deoxyribonucleoprotein DNP ) , RNA 与蛋0质结合成核糖核蛋D ( ribonucleoprotein , RNP )。其中真核 生物的 DNA 又有染色体 DNA 与细胞器 DNA 之分。前者位于细胞核内，约占 95%，为双链线性分子；后者存在于线粒体或叶绿体等细胞器内， 约占 5%，为 双链环状分子。除此之外，在原核生物中还有双链环状的质粒 DNA ；在非细胞 型的病毒颗粒内，DNA 的存在形式多种多样，有双链环状、单链环状、双链线 状和单链线状之分 DNA 分子的总长度在不同生物间差异很大，一般随生物的 。 DNA 3.0x ( ) , 进化程度而增长 如人的 大约由 个碱基对 base 组成 。 109 pair bp ， 与 5 243bp 的猿猴病毒 ( simian virus 40,SV40 ) 相比，其长度约为后者的 5.7 105 RNA DNA RNA 倍 相对来讲， 分子比 分子要小得多 由于 的功能是多样性的， 。 。 RNA 的种类、 DNA DNA RNA 大小和结构都较 多样化。 与 性质上的差异决定了 两者的最适分离与纯化的条件是不一样的。 一、材料与方法的选择 (一）材料与方法的选择 、 、 、 ； 临床常见的标本有血液 尿液 唾液 组织及培养细胞等 核酸分离与纯化 的方法非常多，如何恰当地收集与准备材料，选择适宜的分离与纯化方法是…个 首要的问题 首先我们应当明确核酸的分离与纯化并不是最终的 ，不同的实 。 0的 验研究与应用对核酸的产量、完整性、纯度和浓度可能有不同的要求 至于分离 ； ； ，应 与纯化核酸所需的时间与成本也往往需要考虑 在不影响核酸质量的情况下 选择安全无毒的试剂与方案。近年来，有关试剂盒的开发与自动化仪器的使用， 能批量制备核酸样品，大大提高了分离与纯化的效率。 ( .) 选 择 的 原 则 ，