基因的结构与功能.pptxVIP

基因的结构与功能;第一节 基因一、基因概念（需记住）;二、DNA结构特点及性质;核苷:由戊糖和碱基以C-N糖苷键连接而成 ;核苷酸:核苷+磷酸;一个核苷酸3’位羟基和相邻核苷酸5’位磷酸形成3’，5’磷酸二酯键相连形成多核苷酸链;三、DNA双螺旋结构和染色体结构;二级结构 ; 其它类型DNA 三股螺旋 十字型结构 (hairpin structure). DNA超螺旋结构、正超螺旋、负超螺旋、核小体、染色单体. ;1.三股螺旋DNA （triplex）;2.十字型结构（hairpin structure，发夹结构);3.DNA三级结构——超螺旋（supercoil）; 染色体结构;染色质基础结构单位-核小体;核小体组成染色质丝-多级螺线管模型;染 色 体;基因的结构与功能;染色质与染色体;四、DNA理化性质;核酸变性、复性和杂交 1.DNA变性(denaturation): 变性定义： 变性作用是核酸主要性质； 是核酸双螺旋区氢键断裂，变成单链； 核酸变性不包括共价键断裂； 核??酸骨架上3’5’磷酸二酯键断裂称核酸降解。 变性特征： 生物活性个别丧失 粘度下降 浮力密度升高 紫外吸收增加（增色效应） 变性原因: 加热 pH（11.3或5.0） 变性剂（脲、甲酰胺、甲醛）;解链温度（Tm）:使50%DNA发生变性时环境温度. 简单常见计算方法： Tm值＝4*(G＋C)＋2*(A＋T) 如：ATGGTACATGACCTAGCTAAGC 其Tm=4*10+2*12=64℃ ;Tm值大小主要与以下原因相关 （1）DNA均一性； （2） G-C相对含量: (G+C)%=(Tm-69.3)×2.44。 （3）介质离子强度低,Tm低. （4）高pH下碱基去质子而丧失形成氢键能力 （5）变性剂如甲酰胺、尿素、甲醛等破坏氢键,妨碍碱基堆积,使Tm下降;2.DNA复性（renaturation)：在适当条件下,变 性DNA两条互补链再恢复整天然双螺旋结构 过程. 影响复性原因: ①序列简单分子复性快,如poly(dT)和poly(dA) ②DNA片段愈大,扩散速度愈低,复性慢 ③离子强度↑→有利于复性 ④DNA浓度↑→复性↑;3.核酸分子杂交（hybridiazation）：起源不一样两条单链核酸分子经过碱基互补配对形成异源双链过程. ;核酸分子杂交技术：用标识核酸探针(已知 序列)检测样品中未知核酸序列方法 ; 探针:放射性同位素或荧光标识DNA或RNA片段;常见标识物： （一）放射性标识物： 32P、3H、35S、14C、125I、131I 特征： ①检测特异性强，灵敏度高 ②不影响碱基配正确特异性和稳定性 ③易造成放射性污染 ④半衰期短，不能长时间存放 检测：放射自显影检测杂交信号 ————放射线能够在X射线片上成影;（二）非放射性标识物;非放射性探针检测方法：;核酸分子杂交技术;Southern印迹法：将电泳分离后DNA片段从凝胶转移到硝酸纤维素膜上,再进行杂交. -------1975年英国E M Southern首创 Northern印迹法：将电泳分离后RNA吸印到纤维素膜上再进行分子杂交. --------1977年G.K.Stark首创;二.常见固相杂交类型;;附：蛋白质免疫印迹技术（western) 待检分子：蛋白 杂交方式：经电泳分离不一样蛋白，转印到硝酸纤维素膜上，用特定抗体与蛋白杂交，检测特定蛋白 所用抗体： 1、一抗：针对待测分子抗体 2、二抗：针对一抗抗体，标识有放射性同位素或生物素 ;;;基因的结构与功能;真核生物基因组结构与功效特点;关于真核生物基因结构一些主要概念： 结构基因、外显子、内含子、开启子、TATA盒、CAAT盒、GC盒、增强子、终止子、假基因、基因家族， 重复序列、高度重复序列、卫星DNA、中度重复序列、重复序列多态性、限制性片段长度多态性（RFLP） 结构基因、顺式作用元件（ cis-acting element)、反式作用因子、基因家族(gene family)、重复序列(repeat sequence) 端粒(telomere);结构基因： 决定合成某一个蛋白质或RNA分子结构对应一段DNA。其功效是把携带遗传信息转录给mRNA，再以mRNA为模板合成含有特定氨基酸序列蛋白质或RNA。;结构基因包含四个区域; 编码区，包含外显子和内含子； 前导区，位于编码区上游，5’端非编码区； 尾部区，3’端非编码区； 调控区，包含开启子和增强子； ;外显子（exon）：真核生物基因一个别，在剪接后被保留下来，在蛋白质生物合成过程中被表示为蛋白质。 内含子（intron）：在转录后加工中，从最初