罗氏realtime PCR操作指南(Roche LightCycler480)点击.docxVIP

教程指南 | 借鉴参考 PAGE PAGE 1 word文档 | 实用可编辑 一．配制好反响体系，封好膜。接通LC480与电脑电源，电脑帐号operator，密码LC480，点击LC480软件，登录帐号user，密码Master1。 二．开场实验：点击，在列表中选择对应的程序，如H1N1或HBV，点击窗口右下角的，点击软件界面右下角的，输入实验文件名点击窗口右下角的开场实验。 三．编辑子集：点击subset editor，点击左下角的，按ctrl键的同时鼠标选择本次实验的孔，最后点击应用。注意，一次实验可以同时运行一样扩增参数的多个实验〔如H1N1、HIV与HCV〕，那么可以分别设置多个子集 设置样品：先在subset中选择本次实验的子集，点击左上角的，样品输入样品名，再选择标准品类型和浓度或者阳性对照/阴性对照 四．数据分析： 实验运行完成后进入，选择Abs Quant/Fit Ppoint，在窗口中的Subset〔第二行〕中选择本次实验的子集，点击软件界面中上方的，在Noise Band中调节noise band高度，使之处于对数增长期并高于所有噪音信号，如右图。 再点击进入，点击软件界面中间偏右的自动设置阈值或手工调节阈值〔鼠标左键按住拖动或在输入阈值大小〕，再点击软件界面左下角的，软件左下方出现每个样品的Ct值或浓度值等以及平均值标准误等信息，该局部可以鼠标拖动滑块