植物原生质体组织培养.pptVIP

* 但PEG对原生质有一定的毒害作用。 PEG分子具有轻微负极性，可与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成氢键。当PEG分子链足够长时，它在相邻原生质体表面之间起分子桥作用，引发原生质体粘连。与膜相连的PEG分子被洗掉后，膜上电荷发生紊乱而重新分配。当两层膜紧密接触区域的电荷重新分配时，可能使一种原生质体上的带正电荷的基团连到另一种原生质体的带负电荷的基团上，导致原生质体融合。 * ．在应用PEG进行融合时，重要的影响因素是PEG的种类、纯度、浓度、处理时间、原生质体的生理状况和密度．近年来一些研究者建议在PEG 溶液中加入融合促进剂(如伴刀豆球蛋白，二甲基亚砜，链霉素蛋白酶等)，可以有效地提高原生质体融合的频率． Senda建立的电融合法发展迅速，是目前最流行的融合方法 * 利用融合细胞所具有的可见标记，在倒置显微镜下，用微管将融合细胞吸取出来进行选择的方法。 常用的可见标记为叶肉细胞的绿色。 应用荧光染料标记，在荧光显微镜下分离或用流式细胞仪分拣。 以亲本为对照进行形态特征、特性鉴定；最好要有明显的标记特征，如气孔大小及在叶背表皮上分布密度等。 * 是用FITC(异硫氰酸荧光素)和RITC(异硫氰酸罗丹明)将烟草叶肉细胞分别进行荧光标记。由于FIT℃ 在荧光显徽镜下呈绿色，RITC呈红色。 * 显带染色是将染色体经过一定程序的处理,并用特定的染料染色后,使染色体