液相分析方法开发指南.pdfVIP

3 [ ] 内容 内容提要 工作流程 1 启动 2 方法筛选 3 方法优化 8 方法验证提示 10 缓冲盐性质表 11 色谱柱选择与推荐(流程图形式) 12 溶剂相溶性 18 UV 19 常用溶剂的 截止波长 UV 20 流动相改性剂的 截止波长 沃特世电子版色谱柱选择图表 21 [ 工作流程 ] 一、工作流程 色谱方法开发通常耗时且费力。大家常采用的方法是，用已经习惯使用的溶剂、pH 条件、缓冲盐、以及常用色谱柱的组合，作为起始条件，然后对流动相的比例进行 一系列的调整，直至获得比较满意的峰形与分离。但这样的工作方式，通常极为耗 时，而且也并不能获得最佳分离条件。 更为系统性的方法策略，是利用好的实验设计，并遵循以下流程，进行高效、高质 量的反相色谱方法开发。这个方法开发流程包括： n 方法筛选：流动相pH 、有机溶剂、以及色谱柱，作为对选择性影响最大、因而也 是最重要的条件因素，首先被加以筛选。 n 方法优化：对以上得到的所有结果，评估这三个因素的何种组合，获得了最佳分 离效果。在这个组合条件的基础上，进行优化或微调，以获得最终想要的结果。 n 方法验证：对最终的方法进行验证，检查它是否满足预期的分离效果与分析 目的。 方法筛选 方法优化 方法验证 ■ 色谱柱化学 ■ 梯度 ■ 适用使用目的 ■ 缓冲剂pH ■ 斜率 ■ 有机相 ■ 柱温 1 [ 启动 ] 二、启动 为了设计一个有效的测试方法摸索试验，尽可能多地搜集关于样品和被分析物化学 特性的信息是很重要的。 方法开发所需信息 n 样品溶解性能 n 被分析物数量：需要分离多少分析对象色谱峰？ n 化学结构 n 功能基团 ■ 被分析物有何区别？ ■ 有无可电离基团？电离常数？ ■ pH值如何影响色谱分析？ n 检测 ■ 需要或可能采用何种检测？ ■ 被分析物是否有紫外吸收？ ■ λmax？ n 浓度范围和定量要求 ■ 需要多高检测水平？ ■ 需要多大定量限？ n 样品基质影响 ■ 是否有阻碍分离或检测的基质影响？ 方法使用目的 在开发一种测试方法之前，还需要考虑，是否理解和明确了测试方法的目标和使用 目的，清楚理解使用目的将有助于确定必须要满足的性能参数以及验证方法所需关 键参数，例如可能需要从样品的所有组分中分离一种对象被测物的方法，或者可能 需要既能从其它组分中分离对象被测物、也能使所有组分之间能够相互分离的方 法，其它考虑因素可能还包括：需要多大通量？需要多大分辨率？可以接受的拖尾 因子等。我们采用帕罗西汀有关物质分析方法开发实例来展示系统策略。 2 [ 方法筛选 ] 三、方法筛选 1. pH的影响 pH 当分析物含有可电离官能团时(可电离官能团指，在不同的 条件下可处