药物分析学—体内药物分析.ppt

第三节 体内样品分析的前处理 * 液液萃取应用特点 确定合适的萃取溶剂 依据相似相溶原则 正己烷 → 乙醚 → 乙酸乙酯 → 正丁醇极性增大 有机相:水相=1:1~5:1 调节水相pH值 水相pH值主要由药物的pKa确定 碱性药物最佳pH值要高于pKa值1-2个pH单位 酸性药物则要低1-2个pH单位 酸化：0.1mol/l HCl碱化：0.1mol/l NaOH 固相萃取 solid-phase extraction SPE ★ 根据色谱理论发展的一种前处理方式 将具有吸附、分配或离子交换性质的担体作为萃取剂填入小柱，溶剂淋洗活化后，将生物样品通过小柱，使其药物或杂质保留在担体上，选择一种溶剂洗去杂质，再用适当溶剂将药物洗脱下来。 常用担体：疏水性的C18化学键合硅胶等 第三节 体内样品分析的前处理 * 固相萃取基本操作 固定相 C18 先甲醇润湿小柱再用水除去多余甲醇 1) 活化 * 固相萃取基本操作 1)活化 2)上样 液体样品 内源性物质 其他外源性物质 待测药物 * 固相萃取基本操作 1)活化 2)上样 3) 淋洗 选择不同极性溶剂依次为：水，由低到高比例的甲醇 内源性物质 其他外源性物质 待测药物 淋洗溶剂 * 固相萃取基本操作 1)活化 2)上样 3) 淋洗 淋洗的目的：除去生物样品的干扰，待测药物仍然保留在SPE柱上 内源性物质 其他外源性物质 待测药物 淋洗溶剂 * 固相萃取基本操作 1)活化 2)上样 3) 淋洗 4) 洗脱 100%甲醇为洗脱剂 内源性物质 其他外源性物质 待测药物 淋洗溶剂 洗脱溶剂 * 固相萃取基本操作 收集洗脱液，其中含有待测药物 直接进样分析浓缩后进样分析 待测药物 洗脱溶剂 1)活化 2)上样 3) 淋洗 4) 洗脱 * 固相萃取基本操作 内源性物质 其他外源性物质 待测药物 淋洗溶剂 洗脱溶剂 活化 上样 淋洗 洗脱 * 固相萃取应用特点 根据药物性质选择适合的柱填料，以提高提取回收率 处理速度快，具有一定通量，较容易自动化或联用 第三节 体内样品分析的前处理 * 固相微萃取技术（SPME) SPME装置简单，类似于气相色谱微量注射器，其基本装置如图 1．压杆 2．简体 3．压杆卡持螺钉 4．Z形槽 5．简体视窗 6．调节针头长度的定位器 7．拉伸弹簧 8．密封隔膜 9．注射针管 10．熔融石英纤维 11．熔融石英纤维 * 第三节 体内样品分析的前处理 固相微萃取技术（SPME)操作方法 固相微萃取方法分为： 萃取过程和解吸过程两步 ①萃取过程—具有吸附涂层的萃取纤维暴露在样品中进行萃取 ②解吸过程—将已完成萃取过程的萃取器针头插入气相色谱进样装置的气化室内，使萃取纤维暴露在高温载气中，并使萃取物不断地被解吸下来，进入后序的气相色谱分析。 * 固相微萃取技术（SPME)的特点 第三节 体内样品分析的前处理 * ① 集采样、萃取、浓集、进样于一体，避免引入多步操作误差 ② 无需萃取溶剂，样品量小、空白值小 ③ 萃取选择性高 ④ 纤维涂层（萃取头）可重复用上百次 ⑤ 适用于分析挥发性和非挥发性物质 ⑥ 与GC及HPLC、MS等联用，自动化分析 目前SPME使用的固相涂层种类限制了它的应用，但该法极具前途 （3）缀合物的水解 第三节 体内样品分析的前处理 * （4）化学衍生化 第三节 体内样品分析的前处理 * 体内药物分析的一般流程 血样 尿液 唾液 胆汁 组织器官 前处理方法 分离 纯化 浓集 样品测定 方法建立 方法优化 方法学研究 灵敏度 准确度 精密度 线性和范围 耐用性 …… 灵敏、准确、快速、简便 体内样品分析方法与方法验证 * * 第四节 体内药物分析方法的建立与评价 一、分析方法的选择 灵敏度 专属性 光谱法 + + 刚开始应用较多双波长，导数 色谱法 +++ +++ HPLC GC 免疫法 ++++ ++ 免疫交叉反应，重现性 * 二、分析方法的设计依据 方法的建立 原始方法改进→创新 创立方法 1．做好文献总结 2．充分了解药物特征及体内状况 pH、亲脂性、溶解度、极性、光谱特征、药动学参数、体内代谢情况 3．明确测定目的、要求目的 4．结合实验室条件 设备条件 预处理方法 药浓监测 药代动力学研究 母体药物和代谢物 * 二、体内样品的采集 第二节 体内样品的制备与储存 1．血样 血样浓度与作用点的浓度密切相关，可以反映靶器官的浓度。 血液 抗凝 自然 全血 血细胞 血浆（plasma） 血小板 血清（serum） 血细胞 测定血样中平均分布于细胞内和细胞外的药浓 第二节 体内样品的制备与储存 2．尿样