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细胞免疫荧光实验报告
1. 实验器材及试剂
1.1 实验器材
名称 厂家 型号
载玻片 Wanwu
涡旋混合器 Wanwu MX-F
掌上离心机 Wanwu 物 D1008E
脱色摇床 Wanwu TSY-B
移液枪 Dragon KE0003087/KA0056573
组化笔 Wanwu 日本 WG1066-1
万
正置荧光显微镜 尼康 NIKON ECLIPSE C1
成像系统 日本尼康 NIKON DS-U3
肥
1.2 主要实验试剂
合
试剂 厂家 货号 稀释比
PBS缓冲液 Wanwu G0002 物
破膜工作液 Wanwu G1204
BSA Wanwu G5001
一抗： 万
二抗：
DAPI Wanwu
G1012
肥
抗荧光淬灭封片剂 Wanwu G1401
2. 实验步骤 合
2.1细胞破膜：爬片稍甩干后用组化笔在盖玻片中间细胞分布均匀的位置画圈 （防止抗体流
走），加50-100μl破膜工作液，室温孵育20min，PBS洗3次，每次5 min。
2.2血清封闭: 在圈内滴加用3%BSA均匀覆盖组织，室温封闭30min。 （一抗是山羊来源用
10%驴血清封闭，一抗其它来源的用3%BSA封闭）
2.3加一抗：轻轻甩掉封闭液，在细胞孔板里滴加PBS按一定比例配好的一抗，细胞培养板
网址：
细胞网址：
地址：合肥市蜀山区长江西路248号11层
电话： 400-1016-218
邮箱：2028438226@
平放于湿盒内4°C孵育过夜。
2.4加二抗：细胞孔板置于脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。稍甩干后在圈内滴加与一
抗相应种属的二抗覆盖组织，室温孵育50min。
2.5 DAPI复染细胞核：爬片置于PBS （PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
2.6封片：爬片置于PBS （PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。玻片稍甩干
后用抗荧光淬灭封片剂封片。
2.7镜检拍照：切片于荧光显微镜下观察并采集图像。 （DAPI紫外激发波长330-380nm，发
射波长420nm，发蓝光；FITC激发波长465-495nm，发射波长515-555nm，发绿光；CY3激
发波长510-
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