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大鼠视网膜血管网铺片PAS 染色 一、染色机制： PAS染色又称过碘酸雪夫染色，糖原染色。一般用来显示糖元和其它多糖物 质。过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff 氏液的无色品红 结合呈现红色，定位于胞浆上。 二、染色应用： 随着医学实验技术的发展，糖原染色应用的范围更加广泛，如用以证明与鉴 别细胞内空泡状的性质 ，心肌病变及其他心血管疾病的诊断 ，糖原累积病诊断 物 和研究 ，糖尿病的诊断和研究 ，用于某些肿瘤的诊断等。而视网膜是由大脑向 外延伸的视觉神经末梢组织，其结构复杂，精细，脆弱而代谢旺盛。其血管属于 万 终末血管系统，任何病理性的破坏和血管阻塞等引起的组织缺氧，均能导致组织 坏死，使其丧失感受和传导光刺激的功能。因此血管改变是视网膜病变的重要特 点。视网膜血管铺片是研究视网膜血管病变的重要技术。 肥 三、试剂配制： 合 试剂名称 厂家 货号 胰蛋白酶消化液 Wanwu G4004 物 PAS染色液 Wanwu G1008 四、消化及染色步骤： 万 1. 4% 12h 取材：取带有视神经的大鼠眼球， 多聚甲醛固定 以上。 肥 2. 4% PBS 剥离：从 多聚甲醛中用尖头镊子取出眼球， 充分洗涤除去固定液，然 后放入装有PBS溶液的培养皿 直径( 10cm)中。用尖头镊子夹住眼球的视神经将 4-5 眼球取出，用拇指和食指轻轻夹住眼球，用细针头沿锯齿缘扎 下，使房水流 合 1 出，用眼科剪沿锯齿缘环形 （图 红色箭头所示位置）剪开虹膜，再用尖头镊子 轻轻剥离前眼部分的角膜和晶状体，浸入PBS溶液中轻轻漂洗，洗掉玻璃体后， 3-4 以视神经乳头为中心将杯状眼球壁均匀分成 份，用尖头镊子轻轻剥离出内壁 2 PBS 30min-12h 的视网膜层 （图 ），将剥离下来的视网膜在 溶中浸洗 ，根据实 际工作情况安排时间。 物 万 肥 图 1 眼球示意图。 合 物 万 肥 合 物 万 肥 合 图 2 大鼠视网膜玻璃。 3. 消化：用干净的粗口玻璃吸管吸出视网膜，放入装有10mL 胰酶消化液的15