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会计学 1 理学高二生物基因工程原理和技术选修 一、获得目的基因 从基因文库中寻找 聚合酶链式反应（PCR）扩增 化学合成法 目的基因的核苷酸序列未知 目的基因的核苷酸序列已知 第1页/共37页 基因组文库 部分基因文库 第2页/共37页 基因组DNA文库 cDNA文库 基因组DNA文库与cDNA文库的比较 第3页/共37页 基因文库中不是直接保管相应基因，而是保存受体菌，菌中含基因 第4页/共37页 利用PCR提取目的基因 PCR：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 原理：DNA双链复制 原料：模板DNA；DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；离子 第5页/共37页 PCR的基本原理 类似于DNA的体内复制。首先待扩增DNA模板加热变性解链，随之将反应混合物冷却至某一温度，这一温度可使引物与它的靶序列发生退火，再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环，PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复。 第6页/共37页 前提: 已知目的基因的脱氧核苷酸序列 方法：DNA受热变性解旋为单链、冷却后DNA引物与单链相应互补序列结合、DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。 指数增长 归纳 第7页/共37页 Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus) 酶活性(%) 温度(℃) 40 50 60 70 80 90 100 100 80 60 40 20 第8页/共37页 72℃ 94℃ 55℃ PCR循环 第9页/共37页 PCR反应 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 重复1~3步 25~30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 DNA变性 形成2条单链 子链延伸 DNA加倍 第10页/共37页 模板DNA 第11页/共37页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 引物1 引物2 第12页/共37页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 引物1 引物2 Taq酶 Taq酶 第13页/共37页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 第1轮结束 第2轮开始 第14页/共37页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 Taq Taq Taq Taq 第15页/共37页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 第2轮结束 第16页/共37页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 模板DNA 第1轮扩增 第2轮扩增 第3轮扩增 第4轮扩增 第5轮扩增 第6轮扩增 第17页/共37页 从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 利用化学方法人工合成 归纳：获取目的基因的方法 2构建载体 第18页/共37页 形成重组DNA分子 方法：同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接。 第19页/共37页 将重组DNA分子导入受体细胞 导入植物细胞 补充归纳导入方法 （重组DNA分子导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞） 第20页/共37页 将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 导入动物的方法 第21页/共37页 将目的基因导入动物细胞 显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中） 导入微生物 第22页/共37页 将目的基因导入微生物细胞 4检测和鉴定 Ca2＋处理受体细胞成为感受态细胞，再进行混合。 第23页/共37页 筛选含有目的基因的受体细胞目的基因的表达 检测: 是否插入目的基因 是否转录 是否翻译 鉴定: 功能活性鉴定 抗性鉴定 分别提取什么进行检测 第24页/共37页 DNA 附着在膜上 硝化纤维素 加探针 报告基因（含荧光素分子） 变性 DNA杂交 （如检测SARS病毒等） a b c d 第25页/共37页 ①检测是否插入目的基因，利用DNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的DNA杂交，看是否有杂交带。 ②检测是否转录出了mRNA，利用DNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的mRNA杂交，看是否有杂交带。 ③检测目的基因是否翻译成蛋白质。抗体与蛋白质进行抗原－抗体杂交，看是否有杂交带。 ④还可以进行个体水平的鉴定，根据其性状。 提示：①DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA，然后高温解成单链，再与同位素标记的DNA探针杂交；②抗原－抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的。 第26页/共37页 32．（8分）将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗， 饲喂转基因马铃薯可使动