原代肿瘤细胞的分离培养.docxVIP

原代肿瘤细胞的分离培养 原代肿瘤细胞的分离培养 实验目的：从新鲜人体标本中分离肿瘤细胞 实验器材：新鲜人体乳腺癌组织 　　　　　胶原酶（Ⅰ、Ⅳ型胶原酶干粉溶解于DF12培养基，浓度1mg/ml），DMEM培养基，胎牛血清，PBS，双抗（青链霉素，100×） 　　　　　手术器械，培养皿，培养瓶，离心管，恒温摇床，离心机，倒置显微镜，细胞培养箱 实验原理： 酶消化法是把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。? ?酶消化分离法常采用胰蛋白酶和胶原酶。胰蛋白酶是一种胰脏制品，主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键，使细胞间质中的蛋白质水解而使细胞分散开，适于消化细胞间质较少的软组织，能有效地分离肝、肾、甲状腺、羊膜、胚 隔30min于镜下观察一次。 待组织块镜下透光性良好，呈絮状时，转入15ml离心管中，1300r/min离心5min，弃上清。 加入PBS洗涤数次，反复吹打后，1300r/min离心5min，弃上清。 加入DMEM完全培养基（含1×双抗），反复吹打，转入培养皿中，镜下可见单个细胞及细胞团，细胞培养箱培养。 注意事项： 全程严格无菌操作。 取材要注意新鲜