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- 2022-05-22 发布于江苏
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原代神经元培养
神经细胞原代培养从动物(大鼠或小鼠等)的胚胎或新生动物的脑组织取下某一局部区域,分离细胞,培养在培养容器后不再移植,常称为原代神经细胞培养。一、培养前准备1. 器械和器皿器械:外科剪、镊子、虹膜剪等、小剪刀、细镊子和虹膜小刀等各种金属器械如解剖器械,使用后及时刷洗干净,用酒精棉球擦拭后晾干,或经60℃烘干,以防生锈。由于湿热消毒对手术器械容易可用70-80%酒精浸泡1小时以上消毒。器皿:
玻璃瓶及相应的胶塞或胶木螺旋盖,用于分装血清、多聚赖氨酸、解剖液、各种盐
氨酸(Poly-L-lysine,浓度为0.1mg/ml。2)??平衡盐溶液:主要以无机盐和葡萄糖配制而成。各种平衡盐溶液主要的不同点在于NaCl的浓度、离子浓度及缓冲系统的不同,可根据实际需要选用适当的平衡盐溶液。3)??培养液:目前已有现成的干粉出售,按说明书进行配制即可。神经细胞培养需高糖,培养液应含有或加葡萄糖至6g/L。目前培养海马神经元可选用B27无血清培养液。4)??血清:有胎牛血清、小牛血清和马血清等。分装成小瓶,4℃保存备用(分装前需56℃灭活30分钟)。5)??胰蛋白酶溶液:用于分离细胞。先用少量灭菌三蒸水将胰蛋白酶粉末溶成糊状,然后补水至2.5%浓度,振荡摇匀,4℃过夜,待完全溶解后用滤器过滤灭菌,并分装成1-2ml冻存。用前以D-Hanks平衡盐水或其他无钙镁离
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