发酵菌种的制备.pptVIP

类 型 示 例 特 性 活性增加倍数 潜在应用领域 抗 体 人源抗体 亲和性 400 生物制药 酶 天冬氨酸转氨酶 催化特异性 10，000 生物制药 β -内酰胺酶 抗生素抗性 32，000 抗生素 枯草杆菌蛋白酶E 耐热性 65℃耐热时间 17 200 工业酶 细胞因子 人类干扰素 抗病毒 285，000 基因治疗 肿瘤抑制因子P53 37℃半衰期 12 基因治疗 代谢途径 砷酸盐代谢途径 砷酸盐解毒 40 生物制药 汞代谢途径 汞解毒 12 生物制药 部分DNA Shuffling技术的研究成果 * 精品课件资料 DNA改组(DNA Shuffling)技术的应用领域 　 分　类　 用途 进化DNA 转基因；疫苗载体；DNA疫苗；表达载体；基因转移载体 进化蛋白 基因治疗用酶；细胞因子；生长因子；抗体；工业酶 进化生物体 植物；科研用生物体；化学及药物加工；疫苗有机体；石油加工；除污生物 * 精品课件资料 1）菌种的退化及原因 菌种退化：指在较长时期传代保藏后，菌株的一个或多个生理性状和形态特征逐渐减退或消失的现象。 常见的菌种衷退在形态上表现为分生孢子的减少或菌落颜色的改变，与由于环境条件变化而引起菌落形态和生理上的变异是不同的 。 1.6 菌种的退化与保藏 菌种退化的原因：基因突变、变异菌株性状分离、其他因素（温度、湿度、培养基成分及各种培养条件） * 精品课件资料 1.6 菌种的退化与保藏 狭义的菌种复壮指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定生产性能等方法，从衰退的群体中找出少数尚未衰退的个体，从而达到恢复该菌原有典型性状的目的。 广义的菌种复壮指在菌种的生产性能尚未衰退前，就经常有意识地进行纯种分离和生产性能测定工作，从而逐步提高菌种的生产特性。 2）菌种的复壮 * 精品课件资料 中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）表达系统 具有准确的转录后修饰功能； 具有产物胞外分泌功能，便于下游产物分离纯化； 具有重组基因的高效扩增和表达能力； 具有贴壁生长特性，也可进行悬浮生长； CHO很少分泌自身的内源蛋白。 1.3 工业生产常用的微生物菌种 已工业化产品生产菌的介绍 * 精品课件资料 微生物（包括动、植物细胞）几乎可以生产我们所需的一切产品，但是涉及到工业化生产对于某一种特定的产品，只有特定的微生物才具有大量表达的潜力。 问题： 生产抗生素的微生物能不能用于生产氨基酸？ 礼来(Eli lilly),花了10年的时间从40万株微生物中，发现了三种有潜力的新抗生素。 例： 1.3 工业生产常用的微生物菌种 已工业化产品生产菌的介绍 * 精品课件资料 一、菌种分离的一般过程 样品采集 预处理 → 增殖培养 → 纯培养 → 菌种的鉴定 问题：如何使样品中所含微生物的可能性大 如何在后续的操作中使这种可能性实现 目的：高效地获取一株高产目的产物的微生物 1.4 工业微生物菌种的分离 → → 生产性能测定 复合酶系 复合菌系 * 精品课件资料 二、采样时要注意的问题 气候、水分、空气 来源要广 结合产品的特点 标签：地点、时间、气候等 1.4 工业微生物菌种的分离 * 精品课件资料 富集的三种方案： 定向培养:采用特定的有利于目的微生物富集的 条件，进行培养。 三、目的微生物富集的一些基本方法 富集的目的： 让目的微生物在种群中占优势，使筛选变得可能。 当不可能采用定向培养时，则可设计在一个分 类学中考虑， 不能提供任何有助于筛选产生菌的信息，这 时只能通过随机分离的办法 1.4 工业微生物菌种的分离 * 精品课件资料 定向培养的方法 物理方法：加热、膜过滤等， 但主要是通过培养的方法 1.4 工业微生物菌种的分离 三、目的微生物富集的一些基本方法 2/jing/C76/zcr-1.htm * 精品课件资料 定向培养的富集方法 1、底物 2、pH条件 3、培养时间 4、培养温度 等一切能提高目的微生物相对生长速度的手段，培养（固体、液体；分批、连续）后使目的微生物在种群中占优势。 三、目的微生物富集的一些基本方法 * 精品课件资料 四、菌落的选出 从产物角度出发 在培养时以产物的形成有目的的设计培养基 利用简单、快速的鉴定方法，如抗生素 从形态的角度 菌落的外观形态，是微生物的一个重要表征。如多糖产生菌在适当的培养基上生长，从具有粘液性的菌落外观上就可以初步识别。 1.4 工业微生物菌种的分离 * 精品课件资料 实例：碱性纤维素酶产生菌的筛选 采样（造纸厂） →80℃ 30 min处理 文献:产生菌为中性牙孢杆菌，嗜碱芽孢杆菌、放线菌及霉菌 0.0075%曲利本蓝＋1%CMC（羧甲基纤维素），pH10.5 培养3