同工酶实验PPT课件2.ppt

垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶（活性染色鉴定法） * * 实验目的： 理解同工酶的概念及遗传学意义 学习聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳操作技术 掌握乳酸脱氢酶同工酶及酶活性染色 * * 同工酶 是指能够催化相同的化学反应，但酶分子结构、理化特性乃至免疫 学性质不同的一组酶。它们是由遗传体系决定的在不同组织中表达 的蛋白质作用相同,但分子结构、理化特性等不同。 本实验做的是乳酸脱氢酶（LDH）的分离鉴定。 * * 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理 天然状态生物大分子进行的电泳，利用蛋白质分子中所带净电荷、分子质量、形状的差异，而在电场中泳动的速度和方向不同，达到分离的目的。 多数蛋白质的pH在中性偏酸性范围，通常是将样品在碱性缓冲系统中进行电泳，蛋白质分子带负电荷，以不同速度向阳极迁移，称为阳极电泳； 对于一些碱性蛋白，使用酸性缓冲系统进行电泳，蛋白质分子带正电荷而向阴极迁移，称为阴极电泳。 * * 夹在两块玻璃板之间的凝胶 电泳缓冲液 电泳缓冲液 加在槽中的样品 分子量小 分子量大 电源 * * 电泳过程中分子迁移的规律，小分子走在前头，大分子滞后。电泳凝胶相当于凝胶过滤中的一个带孔胶粒。 混合样品 带孔胶 按分子大小分离 电泳方向 电泳 小分子 大