第十四章基因工程与蛋白质工程.pptVIP

粘性末端连接法 用同一种或两种限制酶去消化载体和外源DNA分子，可产生相同的粘性末端，这些粘性末端能退火互补，进一步用DNA连接酶将断端封口，即可获得重组DNA分子。 用同一种限制酶处理外源DNA和载体，重组时可导致外源DNA特别是质粒的自我环化. 用碱性磷酸脂酶（不处理外源DNA分子）处理粘性末端的5‘磷酸基，能促使载体与外源DNA分子连接。重组体每条链仍残留的一个缺口，待进入宿主细胞内可被修复. 第三十页，共四十五页。 磷酸脂酶能防止载体的自我环化 第三十一页，共四十五页。 用两种限制酶处理载体也可防止环化 第三十二页，共四十五页。 第十四章 基因工程与蛋白质工程 一、基因工程的定义及主要内容 二、重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定 三、克隆基因的表达 四、基因工程的成就和展望 五、蛋白质工程 第一页，共四十五页。 一、基因工程定义及主要内容 基因工程也称基因重组技术、基因克隆或分子克隆. 是指利用DNA重组技术生产或改造生物产品、创建或改良动植物品种以及开发特殊用途的微生物等. 是生物工程的重要内容之一. 第二页，共四十五页。 主要步骤： 1.带有目的基因的DNA片段的获得； 2、构建DNA重组分子； 3、重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定； 4、基因的表达. 第三页，共四十五页。 基因工程基本程序 真核染色体DNA 克隆载体 （质粒）