高春生化药物常用分析方法.pptVIP

双缩脲法是测定蛋白质浓度常用方法之一，它除了操作简便、迅速外，最大的优点是受蛋白质的特异性影响较小，但灵敏度差，所需样品量大。利用铜复合物有紫外吸收的特性，使双缩脲方法能在数十微克水平进行测定。 第29页，共81页，编辑于2022年，星期四 3.4.2．试剂 碱性铜试剂 0.175克硫酸铜溶解于约15毫升水中，置于一100毫升容量瓶中，加入30毫升浓氨水，30毫升冷的蒸馏水及20毫升饱和氢氧化钠溶液，混匀后，放置至使溶液温度与室温相同，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。此试剂在室温下可以放置3-4个月不影响显色。 第30页，共81页，编辑于2022年，星期四 3.4.3．操作步骤 (1)标准曲线制备 每组取7支试管，依次加入蛋白质标准溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，分别补足蒸馏水至3毫升，混匀后各管加2毫升碱性铜试剂，充分混和后，呈现紫色，立即于540nm下测定光吸收（以第一管作空白对照）。 (2)供试品测定 取3毫升样品溶液，加入碱性铜试剂2毫升，充分混匀后，于540nm下测定吸收值，操作条件同标准曲线。 第31页，共81页，编辑于2022年，星期四 3.4.4.注意事项 样品溶液与试剂混合后，有时约30分钟后有雾状沉淀 产生。这种现象对含脂肪类物质的蛋白质抽提液较易发生，而对于纯蛋白质溶液不明显。克服的方法有三种：（1）加入试剂后立即比色，至少