第三章氨基酸copy演示文稿.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 4　离子交换层析 以离子交换树脂作为支持物层析方法 阳离子交换树脂：活性基团是酸性的，如磺酸基-SO3H（强酸型），羧基-COOH（弱酸型） 阴离子交换树脂：活性基团是碱性的，如季胺基-N+(CH3)3OH- 离子交换树脂： 基质+ 活性基团 聚苯乙烯苯二乙烯。 酸性或碱性的基团 第九十四页，共一百零二页。 第九十五页，共一百零二页。 返回 第九十六页，共一百零二页。 第九十七页，共一百零二页。 （厦门大学2010) 第九十八页，共一百零二页。 5.气相色谱 气相色谱适于分析本身具有或经过衍生化后具有挥发性和热稳定性的化合物。 气相色谱分离的优点: 为快速、分离效率高、灵敏度高、便于与质谱联用。 课外阅读 第九十九页，共一百零二页。 6.高效液相色谱（high performance (pressure) liguid chromatography, HPLC） 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。 高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。 HPLC的特点:固相支持物颗粒小，比表面积大；溶剂系统采用高压，流速快；适于各种类型的支持物的柱层析 HPLC分离氨基酸的灵敏度高，可达到10-12mol水平 第一百页，共一百零二页。 第一百零一页，共一百零二页。 氨基酸混合物的分析分离 分离方法 分配柱层析 纸层析（相对迁移率，非极性性质） 薄层层析 离子交换层析（电荷和非极性） 气相层析 高效液相层析 氨基酸的分离方法主要基于氨基酸的酸碱性质和极性大小 第一百零二页，共一百零二页。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 3 烃基化反应 （R’＝烃基） 氨基酸氨基上的氢原子可被一个烃基所取代发生烃基化反应 P137 第六十二页，共一百零二页。 DNFB DNP-氨基酸（黄色） 氨基酸与2,4一二硝基氟苯(DNFB) （sanger试剂）的反应 这个反应首先被英国的Sanger用来鉴定多肽或蛋白质的N末端氨基酸。 DNP-氨基酸，黄色，层析法鉴定. Sanger反应 二硝基苯基氨基酸 第六十三页，共一百零二页。 ② 与苯异硫氰酸（酯）的反应 Edman反应 PITC PTC-氨基酸 PTH-氨基酸 苯乙内酰硫脲衍生物（PTH-氨基酸），无色，可以用层析法分离鉴定。 该反应首先被Edman用于鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸（ Edman反应） 在多肽和蛋白质的氨基酸顺序分析方面占有重要地位。 Edman反应 苯氨基硫甲酰 苯乙内酰硫脲 硝基甲烷 三氟乙酸 在硝基甲烷中与酸作用 硫氰酸根（SCN?）用氮原子配位时生成的化合物 第六十四页，共一百零二页。 4 形成西佛碱（Shiff ’s base）： P137 -H2O 醛 + aa R-CH=N-CH-COOH +H2O R O=C 5 脱氨基反应：在生物体内经氨基酸氧化酶催化即脱去a-氨基酸而变成酮酸。 氨基酸的a-氨基能与醛类化合物发生脱水缩合反应生成弱碱，即西佛碱，在生物体内，西佛碱是以氨基酸为底物的某些酶促反应如转氨基反应的中间物。 第六十五页，共一百零二页。 α-氨基参加的反应 与亚硝酸反应（氨基酸的定量及蛋白质水解程度的测定） 与酰化试剂反应（氨基被酰基化而被保护） 烃基化反应 DNFB反应（生成DNP-aa） PITC反应（生成PTH-aa） 形成西佛碱反应（与醛类化合物） 脱氨基反应 sanger反应：用于蛋白质N-端测定。 Edman反应：用于蛋白质N-端测定，蛋白质序列测定仪设计 原理的依据。 氨基酸的化学反应 第