实验报告(小鼠γ照射后尿中牛磺酸排出量的测定).docxVIP

放射医学实验报告 实验名称实验日期小组成员 一． 实验目的 小鼠γ照射后尿中牛磺酸排出量的测定 2013.5.31 了解电离辐射对蛋白质代谢的影响 二． 实验原理 辐射使机体蛋白质分解代谢加速，代谢过程中含硫氨基酸氧化形成牛磺酸等从尿中排出增加。 尿样用氢型阳离子交换树脂处理后，除出大部分氨基酸，但牛磺酸不被吸附， 滤液与二硝基氟苯（FDNB）作用后生成黄色衍生物，比色测定。 三． 实验器材 实验动物：小鼠 实验试剂：硼酸缓冲液，FDNB，HCl，水，三氯甲烷，标准液 实验器材：移液管（1ml，2ml，5ml，橡胶吸头，），水浴箱，分光光度计 四． 方法与步骤 分别收集正常小鼠和受照射小鼠 24h 尿液（1ml） 尿液离心后取上清液，加水 4ml 稀释 加树脂 2g，振摇 5min 后离心，取上清液 按照下表添加试剂和操作 硼酸缓冲液 空白管 水 1ml 1ml 标准管 标准液 1ml 1ml 正常管 正常尿 1ml 1ml 照射管 照射尿 1ml 1ml FDNB 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 56℃水浴 15min HCl 1ml 1ml 1ml 1ml 水 5ml 5ml 5ml 5ml 三氯甲烷 5ml 5ml 5ml 5ml 取上层液体，用分光光度计测各管液体的吸光值，记录，并计算牛磺酸含量 实验结束，清洗试管、吸管，收拾好实验用品 五． 结果与讨论 1. 实验结果 吸光值测定 空白管 标准管 正常管 照射管 1 —— 0.305 1.01 1.255 2 —— 0.304 1.013 1.260 3 —— 0.305 1.012 1.255 平均值 —— 0.305 1.012 1.257 牛磺酸排出量： mg 牛磺酸/24h 尿 =（样品读数/标准读数）*40*尿稀释倍数*24h 尿总体积*10-3 照射管：1.257/0.305*40*40*1*0.001=6.59mg/L 正常管：1.012/0.305*40*40*1*0.001=5.78mg/L 2．结果讨论： 电离辐射增加机体蛋白质分解代谢。受照小鼠排除尿液中牛磺酸含量明显增高。牛磺酸是体内氨基酸代谢产物。小鼠受照后蛋白质分解代谢增强显著， 主要是由于许多蛋白质水解酶活力增加，如照射后由于溶酶体被破坏，组织蛋白酶释放，活性明显增加，促使细胞内和细胞外蛋白质分解增加。同时，照射后机体摄取食物减少，加强了蛋白质分解代谢，释放大量游离氨基酸。一部分生糖氨基酸通过糖异生的作用转化为葡萄糖，一部分代谢为尿素或其他非蛋白氮，整个机体处于负氮平衡状态。尿中氨基酸及其代谢产物如牛磺酸、肌酸、尿素等排出量增加。 三氯甲烷是萃取剂，将处理后尿液中的其他杂质萃取出来，使其不影响实验结果。 电离辐射降低机体蛋白质合成。电离辐射对蛋白质生物合成有影响，有的被激活，有的被抑制，有的呈双向变化，即先抑制后增强。在血清蛋白方面， 照射后血清白蛋白和γ球蛋白含量下降，而α和β球蛋白含量升高。虽然血清蛋白质成分有升有降，但蛋白质的净合成量是下降的。 电离辐射对生物大分子， DNA，RNA，蛋白质和酶都有损伤，当生物分子的损伤达到一定程度，损伤分子达到一定数量时，将会导致细胞或组织器官的损伤。