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文档之家精品 文档之家精品 PAGE / NUMPAGES 文档之家精品 His标签蛋白纯化原理与步骤 His标签是由6至10个组氨酸残基组成的一种表位标签，很容易被标签特异性抗体识别。His标签是蛋白纯化和检测的常用标签之一，由于其分子量小（只有0.84KD），融合到重组蛋白后，不会影响标记蛋白质的结构和生化特性。His抗体可以用于检测和His标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测His融合表达蛋白等，应用十分广泛。 一、His标签蛋白纯化原理 His标签蛋白纯化通常采用固定化金属离子亲和层析（IMAC）纯化的方法，主要利用介质配体螯合的金属离子吸附纯化表面带组氨酸残基的蛋白。由于His标签可与多种金属离子（如 Ca2+、Mg2+、Ni2+、Cu2+，Fe2+等）发生特殊的相互作用，所以可利用蛋白质表面的特性，使之被吸附在凝胶柱上，从而达到分离纯化蛋白的目的。组氨酸的残基上带有1个咪唑基团，可与Ni2+、Co2+等过渡金属离子形成配位键而选择性结合在金属离子上，这些金属离子能够用螯合配体固定在层析介质上，因此带有His标签的蛋白在经过装配了金属离子的层析介质时可以选择性结合在介质上，而其他杂质蛋白则不能结合或仅能微弱结合。结合在介质上的His标签蛋白可以通过提高缓冲液中咪唑浓度进行竞争性洗脱，从而得到纯度较高的His标签蛋白。 Ni2+、Co2+和Cu2+是